湖州申科在宿主細(xì)胞蛋白（HCP）ELISA 檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域具備深厚技術(shù)積累，已成功搭建高質(zhì)量全流程自有開(kāi)發(fā)平臺(tái)，覆蓋 HCP 檢測(cè)試劑盒研發(fā)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)：①抗原表征與制備：依托合規(guī)平臺(tái)的 HCP Reference/Antigen 制備能力，采用 2D 凝膠電泳等先進(jìn)技術(shù)保障抗原庫(kù)的代表性；②動(dòng)物免疫與抗體制備：憑借自有免疫動(dòng)物平臺(tái)，把控免疫原設(shè)計(jì)及動(dòng)物免疫流程，獲得高特異性、廣覆蓋度的抗體；③體系開(kāi)發(fā)與驗(yàn)證：借助成熟技術(shù)經(jīng)驗(yàn)開(kāi)發(fā)高靈敏度、高穩(wěn)定性檢測(cè)體系，且嚴(yán)格依照 GMP 標(biāo)準(zhǔn)完成方法學(xué)驗(yàn)證。該平臺(tái)通過(guò)全流程自主可控的技術(shù)整合，從源頭保障試劑盒性能的一致性與可靠性，降低不同批次試劑盒的檢測(cè)變異性。其研發(fā)的 HCP ELISA 試劑盒已成功為國(guó)內(nèi)外 200 余家生物醫(yī)藥企業(yè)提供服務(wù)，為單抗、疫苗等生物制品的工藝開(kāi)發(fā)、質(zhì)量控制及 IND/BLA 等法規(guī)申報(bào)，提供符合監(jiān)管要求的定制化檢測(cè)解決方案。

由于宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)試劑盒關(guān)鍵組分（校準(zhǔn)品、檢測(cè)抗體）存在固有且明顯的變異度，不同試劑盒對(duì)同一樣本的檢測(cè)結(jié)果，不僅可能在數(shù)值上出現(xiàn)較大差距，在特定 HCP（如低豐度或高風(fēng)險(xiǎn) HCP）的檢出能力上，也可能存在明顯偏差，這對(duì)生物制品 HCP 殘留的準(zhǔn)確管控構(gòu)成挑戰(zhàn)。因此，為確保檢測(cè)結(jié)果能真實(shí)反映自身產(chǎn)品的 HCP 殘留狀況，企業(yè)必須結(jié)合自身產(chǎn)品特性（如宿主細(xì)胞類型、目標(biāo)產(chǎn)物屬性）與生產(chǎn)工藝特點(diǎn)，對(duì)不同品牌、不同類型的試劑盒開(kāi)展系統(tǒng)且詳細(xì)的平行比對(duì)實(shí)驗(yàn)。同時(shí)，還需進(jìn)行針對(duì)性的適用性評(píng)估，驗(yàn)證試劑盒對(duì)自身產(chǎn)品的檢測(cè)準(zhǔn)確性、特異性及穩(wěn)定性，再篩選出與自身產(chǎn)品匹配度適合的檢測(cè)方案，為生物制品的 HCP 殘留控制提供可靠技術(shù)支撐，保障產(chǎn)品質(zhì)量與用藥安全。

宿主細(xì)胞蛋白（HCP）ELISA 定制化開(kāi)發(fā)平臺(tái)需具備完善的開(kāi)發(fā)體系、可靠的技術(shù)平臺(tái)與專業(yè)的開(kāi)發(fā)團(tuán)隊(duì)，以此實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)期穩(wěn)定供應(yīng)符合法規(guī)要求的試劑盒。其中，校準(zhǔn)品作為關(guān)鍵原材料，其良好的穩(wěn)定性與溯源保障對(duì)試劑盒生命周期至關(guān)重要。為確保校準(zhǔn)品穩(wěn)定，通常采用凍干工藝制備，通過(guò)單因素方差分析方法評(píng)估其均一性，并依據(jù)法規(guī)規(guī)定的蛋白定量方法為校準(zhǔn)品賦值，同時(shí)溯源至國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（如有）或 BSA 國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品，從源頭保障檢測(cè)的準(zhǔn)確性與合規(guī)性，為后續(xù)檢測(cè)體系的可靠運(yùn)行奠定基礎(chǔ)。

湖州申科生物參照 USP 通則 <1132.1> 的相關(guān)內(nèi)容，憑借公司在生物制品質(zhì)量控制領(lǐng)域十余年的深耕經(jīng)驗(yàn)，對(duì) LC-MS 檢測(cè) HCPs 的方法開(kāi)展評(píng)價(jià)與優(yōu)化。同時(shí)通過(guò)為 LC-MS 檢測(cè) HCPs 的整體流程構(gòu)建完整質(zhì)控體系，建立起一套抗干擾能力強(qiáng)、穩(wěn)定性佳、準(zhǔn)確度高且結(jié)果真實(shí)可靠的 LC-MS 檢測(cè) HCPs 標(biāo)準(zhǔn)方法。該檢測(cè)技術(shù)平臺(tái)包含樣品制備、質(zhì)譜檢測(cè)、數(shù)據(jù)生信分析及質(zhì)譜結(jié)果方法驗(yàn)證四個(gè)部分，目前利用該 LC-MS 平臺(tái)已完成對(duì) 293T、不同工藝大腸桿菌（E.coli）、CHO、Vero、MDCK、Sf9 等不同工程細(xì)胞 HCPs 抗體覆蓋率的檢測(cè)分析。

操作規(guī)范是影響宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)結(jié)果的關(guān)鍵因素之一。一方面，實(shí)驗(yàn)人員的專業(yè)能力與實(shí)操經(jīng)驗(yàn)會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，熟練人員可準(zhǔn)確完成樣品處理、試劑配制及儀器操作，降低人為誤差。另一方面，科學(xué)的HCP檢測(cè)方法在開(kāi)發(fā)與應(yīng)用階段，需納入操作的合理變動(dòng)區(qū)間（即耐用性）并配套質(zhì)控措施，從流程層面較大程度規(guī)避人為誤差對(duì)結(jié)果的干擾。此外，嚴(yán)格遵照標(biāo)準(zhǔn)操作流程（SOP）是保障檢測(cè)結(jié)果可靠性的關(guān)鍵，操作步驟不規(guī)范易造成結(jié)果重復(fù)性不佳或誤差擴(kuò)大。目前，湖州申科已正式推出全自動(dòng)HCP ELISA檢測(cè)系統(tǒng)，可完成樣品制備、孵育、洗板到數(shù)據(jù)采集的全流程操作，搭配實(shí)驗(yàn)室信息管理系統(tǒng)（LIMS），能實(shí)現(xiàn)“輸入即輸出”，降低流程誤差。

宿主細(xì)胞蛋白殘留檢測(cè)中，抗體覆蓋率評(píng)估實(shí)驗(yàn)的操作難度較高，需在實(shí)驗(yàn)方法建立階段對(duì)關(guān)鍵步驟開(kāi)展充分驗(yàn)證，以確保實(shí)驗(yàn)方法具備穩(wěn)健性。湖州申科研發(fā)的磁珠捕獲式 IMBS 技術(shù)（immunomagnetic beads separation，免疫磁珠分離），在開(kāi)發(fā)過(guò)程中已對(duì)關(guān)鍵步驟進(jìn)行充分驗(yàn)證，相關(guān)驗(yàn)證結(jié)果已通過(guò)專業(yè)評(píng)審，具體驗(yàn)證內(nèi)容（部分）如下：① 方法優(yōu)化：圍繞磁珠與抗體的偶聯(lián)比例、洗滌液體積、洗滌次數(shù)、洗脫次數(shù)等關(guān)鍵參數(shù)開(kāi)展優(yōu)化驗(yàn)證，確保方法穩(wěn)健性；② 過(guò)程質(zhì)控：二維電泳存在實(shí)驗(yàn)步驟繁瑣、時(shí)間跨度大、中間環(huán)節(jié)難把控等問(wèn)題，因此在等電聚焦實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)引入熒光標(biāo)記多肽，可快速判定等電聚焦效果；同時(shí)在 SDS-PAGE 電泳兩側(cè)增設(shè) 40 ng 銀染質(zhì)控樣品，用于控制銀染顯色過(guò)程；③ 方法重復(fù)性：針對(duì) 2D 分析與 LC-MS 分析開(kāi)展重復(fù)性驗(yàn)證，其中 2D 分析方法的重復(fù)性可達(dá) 80% 以上，LC-MS 分析方法的重復(fù)性可達(dá) 90% 以上；④ 上樣量?jī)?yōu)化：針對(duì) 2D 分析與 LC-MS 分析實(shí)施上樣量驗(yàn)證，規(guī)避上樣量差異對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響；⑤ 假陽(yáng)性排查：排查樣品與陰性抗體間是否存在非特異性結(jié)合，確認(rèn) IMBS 實(shí)驗(yàn)設(shè)定的步驟與參數(shù)是否會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。