導(dǎo)語對于大部分科研人員來說,研究中一般用到均是現(xiàn)成的細(xì)胞系/株,我們只需要:進(jìn)行細(xì)胞傳代和保種。然而,這些細(xì)胞系常常由于體外長期培養(yǎng),而丟失原有生物學(xué)特性,對藥物處理的反應(yīng)差距越來越大。因此,原代細(xì)胞的地位日漸凸顯,Paper中若有了原代細(xì)胞的數(shù)據(jù)都會添色不少。然而,就小編親生經(jīng)歷,原代細(xì)胞分離著實(shí)是個技術(shù)活,我們就結(jié)合自身經(jīng)驗(yàn),為大家介紹:組織和正常組織的原代細(xì)胞的分離與培養(yǎng)方法。部分:原代細(xì)胞的基本知識1.什么是原代細(xì)胞培養(yǎng)?原代細(xì)胞(Primarycells):是指直接從機(jī)體取出的組織或細(xì)胞獲得單個細(xì)胞并在體外進(jìn)行培養(yǎng)的細(xì)胞。這里的組織主要指:組織、外周血及胚胎等。原代細(xì)胞培養(yǎng):由于原代細(xì)胞生長緩慢,繁殖一定的代數(shù)停止生長(一般10代以內(nèi))。所以一般認(rèn)為:培養(yǎng)的原代的第1和傳代到第10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。2.原代細(xì)胞與細(xì)胞系(celllines)的區(qū)別原代細(xì)胞和細(xì)胞系的比較:PrimarycellsCelllines增殖能力較弱強(qiáng)繁殖代數(shù)一般只能傳10代以內(nèi)無限增殖,50代左右遺傳物質(zhì)完整性遺傳物質(zhì)未改變遺傳物質(zhì)發(fā)生改變生物特性接近臨床樣本偏離臨床樣本培養(yǎng)容易程度比較復(fù)雜簡單。骨骼肌的一般形態(tài)特征肌細(xì)胞呈纖維狀,不分支,有明顯橫紋,核很多,且都位于細(xì)胞膜下方。寧夏C57原代細(xì)胞構(gòu)建
具體實(shí)施方式以下結(jié)合附圖和具體實(shí)施例,對本實(shí)用新型進(jìn)行詳細(xì)說明。如圖1至圖5所示,一種新型原代細(xì)胞培養(yǎng)箱,包括若干個用于存放細(xì)胞培養(yǎng)皿的內(nèi)箱盒2、及用于存放所述內(nèi)箱盒的外箱體1,所述外箱體1內(nèi)設(shè)有若干列中空的矩形槽11,各所述矩形槽11的兩側(cè)分別設(shè)有若干層對稱的滑槽111,若干層所述滑槽111由上至下等間距依次設(shè)置,每一層所述滑槽111的正面及背面各存設(shè)有一內(nèi)箱盒2,所述內(nèi)箱盒2包括底盒21、紫外燈23及上蓋22,所述紫外燈23設(shè)于底盒21內(nèi),所述底盒21與上蓋22的一側(cè)通過合頁鉸接,所述底盒21與上蓋22的另一側(cè)通過鎖扣24扣合連接,所述底盒21上設(shè)有推拉把手25,所述底盒21的兩側(cè)分別設(shè)有與滑槽111適配的滑輪211,所述底盒21兩側(cè)的頭部分別設(shè)有與滑槽111適配的滑塊212。如圖1至圖3所示,內(nèi)箱盒2內(nèi)可存放細(xì)胞的培養(yǎng)皿,外箱體1的正面及背面均可存放內(nèi)箱盒2,正背兩面可同時存放內(nèi)箱盒2的設(shè)計(jì),提高了細(xì)胞培養(yǎng)箱的空間利用率,使得細(xì)胞培養(yǎng)箱在同一占地面積的情況下可存儲更多的細(xì)胞培養(yǎng)皿。存放時,只需將內(nèi)箱盒2的滑輪211對準(zhǔn)滑槽111,手持在底盒21上的推拉把手25,通過滑輪211滑動的方式,將內(nèi)箱盒2推送至滑槽111內(nèi)。湖北豚鼠原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到90%以上時,給細(xì)胞傳代。
本發(fā)明采用活塞式推進(jìn)桿外加正壓式肝素帽設(shè)計(jì),增強(qiáng)了瓶身的一體性,減少了污染的可能性,且通過注射器注水的方式可以自行控制纖維板和培養(yǎng)瓶底部的接觸程度,使得操作流程更可控。附圖說明圖1是本發(fā)明的整體結(jié)構(gòu)示意圖。圖2是本發(fā)明的縱向剖面結(jié)構(gòu)示意圖。圖中標(biāo)記為:1-外接圓柱;2-正壓口;3-阻隔環(huán);4-彈簧;5-連接桿;6-加樣口;7-爬片瓶頸;8-纖維板;9-瓶底;10-直角三角支架;11-活動圓盤;12-纖維圓盤;13-瓶身。具體實(shí)施方式下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。如圖1和2所示,一種一體式原代細(xì)胞爬片培養(yǎng)瓶,包括瓶身13,所述瓶身13的其中一側(cè)端部設(shè)有爬片瓶頸7和加樣口6,瓶身13的上端部設(shè)有外接圓柱,所述外接圓柱1的頂端封閉、下端與瓶身13連通,并且外接圓柱1內(nèi)設(shè)有活動圓盤11和纖維圓盤12,所述活動圓盤11位于纖維圓盤12的上方,活動圓盤11的四周外壁與外接圓柱1的內(nèi)壁可滑動接觸,并且在外接圓柱1內(nèi)壁上設(shè)有用于限制活動圓盤11向上活動的阻隔環(huán)3,同時在外接圓柱1位于活動圓盤11上方的柱體上設(shè)有正壓口2,所述纖維圓盤12固定設(shè)置,并且在纖維圓盤12內(nèi)可活動穿插有連接桿5,所述連接桿5上端與活動圓盤11固定連接。
所述鎖環(huán)套設(shè)于鎖塊上。采用上述各個技術(shù)方案,所述的新型原代細(xì)胞培養(yǎng)箱中,所述外箱體的底部還設(shè)有若干萬向腳輪。采用上述各個技術(shù)方案,所述的新型原代細(xì)胞培養(yǎng)箱中,所述外箱體的側(cè)部還設(shè)有方便推拉的扶手。采用上述各個技術(shù)方案,所述的新型原代細(xì)胞培養(yǎng)箱中,所述外箱體內(nèi)設(shè)有3列中空的矩形槽,各所述矩形槽的兩側(cè)分別設(shè)有15層對稱的滑槽。采用上述各個技術(shù)方案,本實(shí)用新型通過將細(xì)胞培養(yǎng)皿存放在內(nèi)箱盒內(nèi),在外箱體的矩形槽設(shè)置若干層對稱的滑槽,各內(nèi)箱盒可從滑槽的正面或背面存放于內(nèi),提高了細(xì)胞培養(yǎng)箱的空間利用率;在內(nèi)箱盒內(nèi)設(shè)有紫外燈,紫外燈單獨(dú)照射于內(nèi)箱盒,使得細(xì)胞培養(yǎng)皿處于無菌無毒的環(huán)境,提高細(xì)胞培養(yǎng)的存活率;在內(nèi)箱盒的兩側(cè)分別設(shè)有滑輪及滑塊,滑輪的設(shè)置使得用戶可方便存取內(nèi)箱盒內(nèi)的細(xì)胞培養(yǎng)皿,滑塊的設(shè)置使得內(nèi)箱盒在處于存放狀態(tài)時更加穩(wěn)固,防止內(nèi)箱盒滑脫至外;整體結(jié)構(gòu)簡單、存儲方便,可推廣使用。附圖說明圖1為本實(shí)用新型的正面立體結(jié)構(gòu)示意圖;圖2為本實(shí)用新型的背面立體結(jié)構(gòu)示意圖;圖3為本實(shí)用新型的外箱體結(jié)構(gòu)示意圖;圖4為本實(shí)用新型的內(nèi)箱盒閉合狀態(tài)結(jié)構(gòu)示意圖;圖5為本實(shí)用新型的內(nèi)箱盒打開狀態(tài)結(jié)構(gòu)示意圖。干細(xì)胞的誘導(dǎo)分化一方面是干細(xì)胞鑒定的主要方法。
下端伸入瓶身并與設(shè)于瓶身內(nèi)的纖維板固定連接,并且在活動圓盤和纖維圓盤之間的連接桿上套裝有彈簧。進(jìn)一步的,所述活動圓盤的四周設(shè)有密封圈。進(jìn)一步的,所述彈簧處于自然狀態(tài)或輕微壓縮狀態(tài)時,活動圓盤與阻隔環(huán)相接觸。進(jìn)一步的,所述纖維板采用具有阻隔和透氣特性的柔性網(wǎng)格纖維材料制作。進(jìn)一步的,所述外接圓柱的直徑為2cm,所述正壓口的直徑為5mm,并可采用肝素帽封閉。進(jìn)一步的,所述活動圓盤和纖維圓盤的直徑為。進(jìn)一步的,所述加樣口為直徑,該開口可通過螺紋連接透氣瓶蓋。進(jìn)一步的,所述瓶身底部的四個角設(shè)置有8個直角三角支架。本發(fā)明的有益效果如下:本發(fā)明可以根據(jù)所要爬片的組織塊大小和數(shù)量提供25cm2和75cm2兩種不同規(guī)格長方體瓶身供爬片,能提高爬片的效率。本發(fā)明采用一體式設(shè)計(jì),減少了原代細(xì)胞提取過程中易發(fā)生的污染的可能性,另外一體式設(shè)計(jì)也減少了新手或不熟練操作流程實(shí)驗(yàn)員的時間成本和器材消耗。本發(fā)明巧妙的利用纖維網(wǎng)格板,一方面網(wǎng)格板的材質(zhì)是柔性的,不易因形變而碎裂,另一方面不僅可以固定組織塊,網(wǎng)格設(shè)計(jì)還可以讓培養(yǎng)基滲入,可謂一舉兩得,且網(wǎng)格板孔徑大小可以定制,滿足不同受眾的要求。本公司分離的SD大鼠心肌細(xì)胞(乳鼠)取自新鮮的組織材料。吉林哪里有原代細(xì)胞購買
常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)可以分為兩大類,一類為瞬時轉(zhuǎn)染,一類為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染(構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株)。寧夏C57原代細(xì)胞構(gòu)建
導(dǎo)致集中消毒設(shè)計(jì)的紫外燈無法有效照射內(nèi)部空間,容易滋生細(xì)菌,影響細(xì)胞培養(yǎng)的存活率。因此,現(xiàn)有技術(shù)存在缺陷,需要改進(jìn)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:本實(shí)用新型所要解決的技術(shù)問題是:提供一種可存放大量細(xì)胞培養(yǎng)皿、空間利用率高、存放方便,具有殺菌消毒作用的新型原代細(xì)胞培養(yǎng)箱。本實(shí)用新型的技術(shù)方案如下:一種新型原代細(xì)胞培養(yǎng)箱,包括若干個用于存放細(xì)胞培養(yǎng)皿的內(nèi)箱盒、及用于存放所述內(nèi)箱盒的外箱體,所述外箱體內(nèi)設(shè)有若干列中空的矩形槽,各所述矩形槽的兩側(cè)分別設(shè)有若干層對稱的滑槽,若干層所述滑槽由上至下等間距依次設(shè)置,每一層所述滑槽的正面及背面各存設(shè)有一內(nèi)箱盒,所述內(nèi)箱盒包括底盒、紫外燈及上蓋,所述紫外燈設(shè)于底盒內(nèi),所述底盒與上蓋的一側(cè)通過合頁鉸接,所述底盒與上蓋的另一側(cè)通過鎖扣扣合連接,所述底盒上設(shè)有推拉把手,所述底盒的兩側(cè)分別設(shè)有與滑槽適配的滑輪,所述底盒兩側(cè)的頭部分別設(shè)有與滑槽適配的滑塊。采用上述技術(shù)方案,所述的新型原代細(xì)胞培養(yǎng)箱中,所述滑槽的高度大于滑塊的高度,所述滑塊的高度大于滑輪的直徑。采用上述各個技術(shù)方案,所述的新型原代細(xì)胞培養(yǎng)箱中,所述鎖扣包括鎖環(huán)及鎖塊,所述鎖環(huán)與上蓋活動連接,所述鎖塊設(shè)于底盒外部。寧夏C57原代細(xì)胞構(gòu)建