然后再入固定液,但要注意防止組織損傷。要熟悉采集部位。要能準(zhǔn)確的按解剖部位采集,如胰腺,一般取胰島較多的胰腺尾部;肺應(yīng)取有細(xì)支氣管及帶有軟骨片的小支氣管部。如果實(shí)驗(yàn)需進(jìn)行多組織樣本的采集,采集順序應(yīng)按照:消化,神經(jīng)系統(tǒng),皮膚,肌肉等的順序進(jìn)行。選好組織塊的切面。熟悉某些組織成分安排,然后決定其切面的走向;如一長(zhǎng)管狀以橫切面較好。切除不需要的部分。特別是組織周?chē)闹镜?,?yīng)盡可能掉,否則給固定、脫水、浸蠟、切片等帶來(lái)一些不必要的問(wèn)題。組織樣品的固定(1)固定的方法:①小塊組織固定法:從動(dòng)物取下的小塊組織,立即置入液態(tài)固定劑(這是應(yīng)用經(jīng)常的方法)。②注射/灌注固定法:某些組織塊由于體積過(guò)大或固定液極難滲入內(nèi)部或需要對(duì)整個(gè)臟器或整個(gè)動(dòng)物進(jìn)行固定,這時(shí)宜采用注射固定法,將固定液注入血管,經(jīng)血管分支到達(dá)整個(gè)組織和全身,從而得到充分的固定。另,空腔組織比如肺,肺內(nèi)含有空氣,固定液難以滲入,建議先做肺灌注,使得肺充盈滿固定液以后再進(jìn)行保存,如果空腔中氣體沒(méi)有有效排出,后續(xù)可能影響固定效果(沒(méi)有灌注的肺組織會(huì)浮在液體表面不利于固定,切片以后也會(huì)看到很多的空泡)。③蒸汽固定法:比較細(xì)小而薄的標(biāo)本。好的動(dòng)物模型能夠較好地模擬疾病狀態(tài),為的研究提供可能。湖南C57動(dòng)物模型構(gòu)建
脂多糖致膿毒血癥肝損傷小鼠模型【方法】1、小鼠稱重,按體重計(jì)算藥物用量。2、脂多糖(LPS)藥物配制,生理鹽水溶解,根據(jù)小鼠體重配制終濃度為10mg/kg,200ul/只腹腔注射使用。3、抓取小鼠,捏緊小鼠頸背部皮膚,小拇指無(wú)名指疊加固定小鼠左下肢充分暴露小鼠腹部。4、小鼠的頭部向下,這樣腹腔中的就會(huì)自然倒向胸部,防止注射器刺入時(shí)損傷腸道。進(jìn)針的動(dòng)作要輕乘,防止刺傷腹部。5、注射器吸取準(zhǔn)備好的藥物,腹腔左下部與身體呈45度角左右斜角進(jìn)針注射LPS,注射完藥物后,輕微旋轉(zhuǎn)針頭退針,防止漏液。6、造模18h后處死小鼠解剖取組織進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。【檢測(cè)】肝組織有無(wú):1、肝水腫;2、肝出血;3、炎性細(xì)胞浸潤(rùn);4、肝組織腫大等病理改變。再觀察肝損傷程度,各按程度積分為:0分為無(wú)該項(xiàng)病理改變;1分為病理變化輕且很局限;2分為病理變化中等且局限;3分為病變中等但或局部很;4分為非常的理改變。求出各動(dòng)物的各項(xiàng)病理改變的總和,作為肝損傷程度積分。上海模式動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)四氯化碳誘導(dǎo)急性肝損傷大鼠模型。
首先,預(yù)實(shí)驗(yàn)必須要當(dāng)做正式實(shí)驗(yàn)來(lái)對(duì)待(態(tài)度要放端正,這是必須的)。預(yù)實(shí)驗(yàn)的每一步都需要詳細(xì)規(guī)劃,多方籌謀。不論是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇,還是檢測(cè)試劑的購(gòu)買(mǎi),都盡量和正式實(shí)驗(yàn)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。建議大家先把所有試劑和藥物購(gòu)買(mǎi)完畢后,再去購(gòu)買(mǎi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。因?yàn)閯?dòng)物會(huì)長(zhǎng)胖,長(zhǎng)胖后給藥劑量就要增加,不僅多花錢(qián),并且還容易影響實(shí)驗(yàn)效果。筆者曾經(jīng)提前將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物買(mǎi)回,但因?yàn)樘厥庠驔](méi)能購(gòu)買(mǎi)到造模藥物,終只能忍痛割?lèi)?ài)將動(dòng)物贈(zèng)送他人,白白虧了一筆血汗錢(qián)(那批老鼠在我這兒白吃白喝長(zhǎng)得太胖,沒(méi)辦法用作造模)。動(dòng)物及試劑購(gòu)買(mǎi)首先需要考慮:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物品種、體重、性別、周齡(通常根據(jù)既往文獻(xiàn)報(bào)道可以獲得答案)、數(shù)量(需要考慮到實(shí)驗(yàn)有一定動(dòng)物死亡率或者動(dòng)物本身會(huì)打架互毆,因此需要提前購(gòu)買(mǎi)足夠的動(dòng)物)。動(dòng)物購(gòu)買(mǎi)的途徑、安置的地點(diǎn),飲食管理(一般實(shí)驗(yàn)室會(huì)有動(dòng)物房,也可以從其他地方購(gòu)買(mǎi)),動(dòng)物免疫證明、倫理證明需要提前準(zhǔn)備好。實(shí)驗(yàn)相關(guān)的試劑和藥物:比如造模藥物和器械,動(dòng)物干預(yù)所需藥物,陽(yáng)物選擇及購(gòu)買(mǎi)(有些藥物購(gòu)買(mǎi)很困難,必須通過(guò)特殊程序才能買(mǎi)到)。如果涉及到有創(chuàng)操作,要提前準(zhǔn)備好物(建議提前購(gòu)買(mǎi)),手術(shù)器械。需要了解自身實(shí)驗(yàn)平臺(tái)能完成哪些技術(shù)。
SD大鼠腦缺血致腦梗死模型【材料】水合氯醛、線栓直徑(體重250-300g)【方法】1、10%水合氯醛(35mg/kg)腹腔注射麻醉。2、仰臥位固定,頸正中線切口,分離肌肉和筋膜,分離左側(cè)頸總動(dòng)脈(CCA)、頸外動(dòng)脈(ECA)和頸內(nèi)動(dòng)脈(ICA)。3、微動(dòng)脈夾暫時(shí)夾閉頸內(nèi)動(dòng)脈(ICA),活扣結(jié)扎近心端頸總動(dòng)脈(CCA)、頸外動(dòng)脈(ECA)打雙結(jié),在雙結(jié)中間剪開(kāi)小口插入線栓。4、將拴線插入到頸內(nèi)動(dòng)脈(ICA),用眼科鑷輕推拴線,以頸外動(dòng)脈(ECA)和頸內(nèi)動(dòng)脈(ICA)分叉處為參考位置。5、栓線插入預(yù)刻深度,感到有阻力,說(shuō)明栓線已到達(dá)腦中動(dòng)脈(MCA),打結(jié)固定栓線。6、血管外的栓線不要留得過(guò)長(zhǎng),1h后拔出栓線,縫合傷口,單籠飼養(yǎng)觀察。注:前兩三天老鼠會(huì)萎靡,不進(jìn)食,注意不要,老鼠無(wú)死亡即可。上面是我們已構(gòu)建成功的動(dòng)物模型,我們還可以根據(jù)客戶實(shí)驗(yàn)方案構(gòu)建其它模型,具體要求請(qǐng)咨詢。
曾為國(guó)內(nèi)、外醫(yī)藥企業(yè)做過(guò)多個(gè)藥物的臨床前藥理研究,研發(fā)產(chǎn)品已成功上市。在中國(guó)工作期間參加完成10項(xiàng)課題,在美國(guó)參與完成了NIH(NationalInstitutesofHealth)及AHA(AmericanHeartAssociation)的多個(gè)基金項(xiàng)目。發(fā)表學(xué)術(shù)論文60余篇,曾獲得省部級(jí)一、二等科技獎(jiǎng)7項(xiàng)。在學(xué)術(shù)期刊如Nature,ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences,JournalofClinicalInvestigation,Circulation,CirculationResearch,Cell,NatureCommunications,NatureMetabolism,ScienceTranslationalMedicine發(fā)表多篇論文。手術(shù)疾病模型精選案例1.心肌梗死模型(左冠狀動(dòng)脈結(jié)扎術(shù))與缺血再灌注損傷模型2.主動(dòng)脈弓縮窄3.慢性心力衰竭模型賽業(yè)生物可提供的小動(dòng)物手術(shù)疾病模型及相關(guān)服務(wù)心腦血管系統(tǒng)手術(shù)心肌梗死模型(左冠狀動(dòng)脈結(jié)扎術(shù))心臟缺血再灌注損傷模型主動(dòng)脈弓縮窄術(shù)(TAC)升主動(dòng)脈縮窄術(shù)腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)(模型)心力衰竭模型肺動(dòng)脈高壓模型大腦中動(dòng)脈栓塞。博來(lái)霉素誘導(dǎo)急性肺損傷小鼠模型。上海豚鼠動(dòng)物模型構(gòu)建
裸鼠皮下成瘤:前肢近腋后皮下注射細(xì)胞懸液; 裸鼠原位瘤:胰腺成瘤;尾靜脈注射成瘤。湖南C57動(dòng)物模型構(gòu)建
通過(guò)無(wú)極調(diào)控微負(fù)壓裝置來(lái)調(diào)節(jié)飼養(yǎng)倉(cāng)2內(nèi)的壓力,通過(guò)高原低氧環(huán)境模擬裝置來(lái)調(diào)整飼養(yǎng)倉(cāng)2內(nèi)氧含量,當(dāng)需要燈光時(shí),通過(guò)高原光照環(huán)境模擬裝置15開(kāi)啟紫外燈以及照明燈,通過(guò)高原溫度環(huán)境模擬裝置16來(lái)進(jìn)行調(diào)溫,通過(guò)高原濕度環(huán)境模擬裝置17調(diào)節(jié)飼養(yǎng)倉(cāng)2內(nèi)濕度,通過(guò)動(dòng)物行為學(xué)遠(yuǎn)程觀察單元18可以監(jiān)控動(dòng)物的行為,飼養(yǎng)倉(cāng)2內(nèi)若干代謝籠3配備投料斗8、飲水瓶9可以進(jìn)行攝食量、飲水量測(cè)定,聚糞斗10、尿液排出口11、糞便排出口12便于模型動(dòng)物的尿液和糞便常規(guī)檢測(cè),并且本系統(tǒng)設(shè)置的多個(gè)代謝籠3可以同時(shí)培養(yǎng)多種動(dòng)物,造模動(dòng)物多。實(shí)施例2在實(shí)施例1的基礎(chǔ)上提供的一種高原性人類(lèi)疾病模型制備環(huán)境模擬系統(tǒng),所述無(wú)極調(diào)控微負(fù)壓裝置包括進(jìn)風(fēng)系統(tǒng)13、排風(fēng)系統(tǒng)14和霍尼威爾或西門(mén)子調(diào)控模塊,所述進(jìn)風(fēng)系統(tǒng)13設(shè)置在功能設(shè)備集成底座1內(nèi),所述排風(fēng)系統(tǒng)14設(shè)置在飼養(yǎng)倉(cāng)2頂部。本實(shí)施例的工作原理:本系統(tǒng)進(jìn)風(fēng)系統(tǒng)13內(nèi)集成有進(jìn)風(fēng)風(fēng)機(jī)單元、排風(fēng)系統(tǒng)14集內(nèi)成有排風(fēng)風(fēng)機(jī)單元。由于飼養(yǎng)倉(cāng)2能夠密封,通過(guò)改變風(fēng)機(jī)風(fēng)量的方式來(lái)調(diào)節(jié)壓差,進(jìn)風(fēng)風(fēng)機(jī)單元和排風(fēng)風(fēng)機(jī)單元均與飼養(yǎng)倉(cāng)2連通,通過(guò)調(diào)節(jié)進(jìn)、排風(fēng)的壓力差值,系統(tǒng)內(nèi)環(huán)境能夠形成(~)微負(fù)壓,系統(tǒng)配置霍尼威爾或西門(mén)子調(diào)控模塊。湖南C57動(dòng)物模型構(gòu)建