所述外顯子序列為第3外顯子序列。進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，利用cre-loxp基因敲除技術(shù)敲除gm20541基因上的第3外顯子序列。上述敲除策略是采用cre-loxp敲除技術(shù)敲除gm20541基因。但在其他的實(shí)施例中，實(shí)現(xiàn)基因敲除的技術(shù)手段有很多，例如crispr/cas9技術(shù)、人工核酸酶介導(dǎo)的鋅指核酸酶技術(shù)(zinc-fingernucleases，zfn)、轉(zhuǎn)錄因子樣效應(yīng)物核酸酶技術(shù)(transceriptionactivator-likeeffectornucleases,talen)等。因此，在其他的實(shí)施例中采用crispr/cas9技術(shù)或其他的技術(shù)手段敲除gm20541基因，也是屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述目標(biāo)動(dòng)物為哺乳動(dòng)物。進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述哺乳動(dòng)物選自小鼠、大鼠、狗、豬、猴以及猿中的任意一種。需要說明是，本發(fā)明所述的目標(biāo)動(dòng)物并不限于上述的動(dòng)物，其他類型的哺乳動(dòng)物也是可行，無論選用何種動(dòng)物，只要是具有g(shù)m20541基因或其同源基因的動(dòng)物，均可作為本發(fā)明所述構(gòu)建方法中的目標(biāo)動(dòng)物，在其前體細(xì)胞中敲除gm20541基因，使其表現(xiàn)出視網(wǎng)膜色素變性性疾病特征，作為視網(wǎng)膜色素變性疾病模型，這也是屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。第二方面。通過建立腦缺血-再灌注動(dòng)物模型，模擬人類ICVD的病理過程。上海模式動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)

四氯化碳誘導(dǎo)急性肝損傷大鼠模型【方法】1、將大鼠隨機(jī)分配至2組中，每組5只，正常喂食喂水7d后進(jìn)行試驗(yàn)；2、大鼠體重為200g±10g，按組別給予藥物：生理鹽水組每只腹腔注射1ml生理鹽水、模型組每只按5ml/kg背部皮下注射四氯化碳3、各組藥物注射24h后取材進(jìn)行相關(guān)檢測(cè)（注：注射前按比例混合四氯化碳：橄欖油=1：）【評(píng)定】給予四氯化碳后TP含量下降，ALT和AST含量上升【檢測(cè)】生理鹽水組肝索結(jié)構(gòu)清晰，血管內(nèi)無淤血，血管周圍無炎癥病灶，肝小葉結(jié)構(gòu)清晰；給予四氯化碳后肝索排列紊亂，結(jié)構(gòu)不清，存在大量壞死區(qū)域且肝索結(jié)構(gòu)消失，有大小不一的空泡結(jié)構(gòu)，多數(shù)血管內(nèi)有淤血并伴有粉染蛋白樣物質(zhì)，血管周圍有炎癥反應(yīng)灶，少量紅細(xì)胞滲出；西維來司鈉介入后肝索排列不清晰，存在部分壞死區(qū)域且肝索結(jié)構(gòu)消失，有大小不一的空泡結(jié)構(gòu)，少數(shù)血管內(nèi)有淤血并伴有粉染蛋白樣物質(zhì)，血管周圍有炎癥反應(yīng)灶，極少量紅細(xì)胞滲出。江蘇大鼠動(dòng)物模型培養(yǎng)上面是我們已構(gòu)建成功的動(dòng)物模型，我們還可以根據(jù)客戶實(shí)驗(yàn)方案構(gòu)建其它模型，具體要求請(qǐng)咨詢。

代謝組學(xué)的研究對(duì)象大都是相對(duì)分子量在1000以內(nèi)的小分子物質(zhì)，因此常用的血液樣本在取樣后，應(yīng)小心操作，防止溶血，盡快分離出血清，分置于溫環(huán)境下保存。由于用于病理實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物組織采集相對(duì)其他樣品的采集，操作更繁瑣，在處理過程中許多細(xì)節(jié)容易忽略，造成數(shù)據(jù)不完美（甚至不能用）。因此接下來將重點(diǎn)介紹組織樣品采集的注意事項(xiàng)及其固定。組織樣品采集注意事項(xiàng)組織應(yīng)新鮮，操作時(shí)間盡可能短，否則細(xì)胞發(fā)生死后變化、自融及現(xiàn)象。是動(dòng)物心臟還在跳動(dòng)時(shí)采集，樣本取出后在5分鐘以內(nèi)置于固定液內(nèi)，避免長時(shí)間暴露在空氣環(huán)境中。組織塊盡量小而薄。組織塊的厚度以不超過5mm為宜，較為理想的厚度為2mm左右，主要目的是使固定液迅速而均勻的滲入組織塊內(nèi)部。勿使組織塊受擠壓。在采集過程中，應(yīng)盡量選擇較為鋒利的手術(shù)器械，如手術(shù)刀片等，避免操作過程中擠壓挫傷標(biāo)本。擠壓過的組織均不可用。固定液的量一般以組織塊大小的20倍為宜，組織能夠在容器內(nèi)自由移動(dòng)。盡量保持組織的原有形態(tài)。新鮮組織經(jīng)固定后，或多或少產(chǎn)生收縮現(xiàn)象（如胃腸），為此可將組織展平，以盡可能維持原形。保持組織清潔。組織塊上如有血液、污物、粘液、食物、糞便等，可用生理鹽水沖洗。

準(zhǔn)備碎冰和。把膜置于甲醇溶液中活化1分鐘，然后轉(zhuǎn)移至轉(zhuǎn)膜液中平衡3分鐘后備用。2、轉(zhuǎn)膜組裝轉(zhuǎn)膜三明治夾，這一步很關(guān)鍵，重要的是膠和膜之間不能有氣泡且膜與膠要保證貼合緊密(否則會(huì)翻車)，可以加多點(diǎn)轉(zhuǎn)膜液泡著。組裝好后加滿轉(zhuǎn)膜液，設(shè)置電源參數(shù)，我習(xí)慣恒流轉(zhuǎn)膜，200-280毫安，1-2小時(shí)，根據(jù)分子量定，如50KD的分子用60分鐘就夠了。如果一個(gè)電源帶兩個(gè)轉(zhuǎn)膜大槽即四塊膠，我就會(huì)用恒壓70-110V。這個(gè)過程重要的是做好降溫。這里簡單說一下蛋白分子量與玻璃板厚度，分離膠的濃度，轉(zhuǎn)膜電源參數(shù)的選擇問題。如果是能用1毫米的玻璃板就不用，因?yàn)檗D(zhuǎn)膜是在電場(chǎng)的作用下蛋白分子從膠上遷移到膜上，1毫米膠的蛋白遷移距離要比。選擇更薄的膠蛋白轉(zhuǎn)膜時(shí)間可以減少，從而減少發(fā)熱，以免膠變形，條帶也會(huì)更好看。然后是分離膠的濃度，如果是150—200KD的分子選10%以下的的分離膠，200—300KD的選8%的,300KD以上的選6%的，小于30KD的200mA30分鐘，30-100KD的按分子量的數(shù)值算，如70KD，250mA70分鐘;100-150KD的250mA100分鐘;150—300KD的分子轉(zhuǎn)膜條件用280毫安(以上均是對(duì)于，)，120分鐘足矣，前提是膠的濃度相適應(yīng)。五、封閉孵一抗1、封閉轉(zhuǎn)膜結(jié)束后。睪丸去勢(shì)致骨質(zhì)疏松大鼠模型。

小鼠尾尖用酒精擦拭尾巴，引起輕微的血管擴(kuò)張；用無菌手術(shù)刀、刀片或鋒利的剪刀，快速截?cái)嘈∈笪布?-2毫米。如果需要多次采，之后每次需截除2-3毫米；從尾部像尾尖方向按摩，增加血流；用采集血液；結(jié)束后，按壓傷口或使用止血?jiǎng)﹣碇寡幻看瘟看蠹s可達(dá)。小鼠眼球取血單手保定好小鼠；必要時(shí)剪掉小鼠胡須，防止污染血液；輕壓取血側(cè)眼部皮膚，使眼球充血突出；用彎頭鑷夾取眼球并快速在摘?。煌瑫r(shí)用左手中指輕按小鼠心臟部位，以加快心臟泵血速度；當(dāng)血液流盡時(shí)，用脫臼法處死小鼠；大鼠眼眶取血先將小鼠進(jìn)行麻醉，大鼠翻正反射消失時(shí)不在繼續(xù)麻醉；抗凝處理過的玻璃毛細(xì)采樣管，掰成2-3厘米長度；右手食指和拇指輕按眼眶兩側(cè)皮膚，使眼球突出，毛細(xì)管從內(nèi)側(cè)的眼球與眼瞼的縫隙處進(jìn)入，輕輕旋轉(zhuǎn)毛細(xì)管，稍微深入眼球后上方，血液流速快的時(shí)候4-5滴即可，溫柔的將毛細(xì)管取出；用棉簽按壓大鼠眼眶止血，每次可取血50-100微升，將血液放入冰盒中保存。小鼠心臟取血先將小鼠麻醉，稍靠右側(cè)平躺在手術(shù)板上固定；左側(cè)第三四根肋骨間觸摸心臟，跳動(dòng)明顯，慢慢進(jìn)針；針有回血停止進(jìn)針，開始取血；一次可以300到500微升，小鼠存活，放到加熱墊上待小鼠蘇醒后放入籠中。裸鼠皮下成瘤：前肢近腋后皮下注射細(xì)胞懸液； 裸鼠原位瘤：胰腺成瘤；尾靜脈注射成瘤。寧夏乳鼠動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)室

大鼠面癱模型的建立。上海模式動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)

brain：腦組織；liver：肝臟；retina：視網(wǎng)膜，intestine：腸；muscle：肌肉；heart：心臟；kidney：腎臟；spleen：脾；b：圖1中a的統(tǒng)計(jì)結(jié)果；c:westernblot檢測(cè)gm20541蛋白在不同組織的表達(dá)；d:圖1中c的統(tǒng)計(jì)結(jié)果。圖2：gm20541基因敲除小鼠的構(gòu)建路線；圖中sixko或cko表示gm20541基因敲除純合子小鼠；ctr是指野生型；het是指雜合子。圖3：中長距離pcr鑒定子一代鼠的結(jié)果；圖中：a：擴(kuò)增5’端長臂使用引物對(duì)gm5’lrf和sa3’r,擴(kuò)增產(chǎn)物為；其中a2,3,6,9,10,b1為陽性；b：擴(kuò)增3’端長臂使用引物對(duì)neof和gm3’lrr，擴(kuò)增產(chǎn)物為。其中：a2,3,6,9,10,b6,9,es1g,es2g為陽性雜合子，+/+為野生型對(duì)照。圖4：gm20541基因敲除小鼠的鑒定；a：gm20541基因敲除小鼠的基因型鑒定結(jié)果；b：實(shí)時(shí)定量pcr實(shí)驗(yàn)分析gm20541敲除小鼠視網(wǎng)膜中基因敲除效率，證明gm20541在敲除小鼠視網(wǎng)膜中不再表達(dá)；sixko或cko表示gm20541基因敲除純合子小鼠；ctr是指野生型；het是指雜合子。圖5：暗適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖(electroretinogram,erg)檢測(cè)結(jié)果；圖中：a-c：不同光強(qiáng)下gm20541基因敲除小鼠的暗適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖軌跡圖；d：不同光強(qiáng)下gm20541基因敲除小鼠的暗適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖a波統(tǒng)計(jì)。上海模式動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)