重組蛋白用宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測橋接驗證
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發(fā)布時間：2025-10-22
湖州申科生物專注于研發(fā)貼合實際生產(chǎn)工藝的商業(yè)化宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測試劑盒，依托不同工藝下 HCP 的差異化分析，針對性推出各細分工藝領域的 HCP 檢測試劑盒。實驗數(shù)據(jù)顯示：針對 CHO-S 與 CHO-K1 兩種宿主細胞，兩類細胞共享 2458 種相同 HCP（占比 79.7%），但各自存在 392 種和 236 種特異性 HCP，充分體現(xiàn)工藝差異帶來的殘留蛋白特異性。進一步對比 B3 表達菌與 K2 克隆菌，盡管二者共享 1489 種相同蛋白（分別占比 88% 和 85%），但仍各自檢出 208 種和 258 種獨有蛋白，差異率為 12%-15%。這些結(jié)果直接證實，不同工藝路線與克隆株選擇會影響 HCP 殘留譜的構成。據(jù)此，湖州申科提出 “工藝定制化檢測” 策略：通過準確識別共性與特異性 HCP，針對性研發(fā)細分試劑盒產(chǎn)品。
基于HCP的復雜性，檢測中常遇到中間品，尤其是原液樣品無法達到稀釋線性，可能與樣品基質(zhì)的干擾有關。重組蛋白用宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測橋接驗證
湖州申科生物參照 USP 通則 <1132.1> 的相關內(nèi)容，憑借公司在生物制品質(zhì)量控制領域十余年的深耕經(jīng)驗，對 LC-MS 檢測 HCPs 的方法開展評價與優(yōu)化。同時通過為 LC-MS 檢測 HCPs 的整體流程構建完整質(zhì)控體系，建立起一套抗干擾能力強、穩(wěn)定性佳、準確度高且結(jié)果真實可靠的 LC-MS 檢測 HCPs 標準方法。該檢測技術平臺包含樣品制備、質(zhì)譜檢測、數(shù)據(jù)生信分析及質(zhì)譜結(jié)果方法驗證四個部分，目前利用該 LC-MS 平臺已完成對 293T、不同工藝大腸桿菌（E.coli）、CHO、Vero、MDCK、Sf9 等不同工程細胞 HCPs 抗體覆蓋率的檢測分析。
廣東工藝特異型宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法學驗證湖州申科HCP試劑盒開發(fā)經(jīng)抗原表征、抗體制備到體系驗證，全流程符合法規(guī)要求。
宿主細胞蛋白（HCP）的來源中，常伴隨核酸、胞膜脂類及培養(yǎng)基中的氨基酸等非HCP成分，這些成分會干擾總蛋白檢測的準確性，因此在檢測前需開展純化前處理，同時對總蛋白檢測方法實施方法學確認。HCP本身屬于多蛋白混合物，不同總蛋白定量方法的檢測結(jié)果會存在一定差異，這也是造成HCP免疫檢測方法結(jié)果不一致的原因之一。若不同HCP蛋白定量方法的檢測結(jié)果差異較大，通常需同時采用2種及以上經(jīng)確認的方法進行檢測，隨后取平均值?？偟鞍讬z測方法的定量限通常只能達到μg/mL級別，而HCP檢測試劑盒的產(chǎn)品校準品濃度則處于ng/mL級別。將HCP高濃度原液稀釋至低濃度產(chǎn)品校準品的過程中會產(chǎn)生稀釋誤差，因此需對產(chǎn)品校準品重新進行標定賦值。編輯分享用多種方法確認檢測結(jié)果時，如何選擇合適的方法組合？總蛋白檢測定量限與HCP校準品濃度差異大的原因是什么？有哪些方法可以降低非HCP成分對檢測的干擾？
大腸桿菌具有遺傳背景明確、便于培養(yǎng)與調(diào)控、蛋白表達量高、成本低廉且培養(yǎng)周期短等特點，是性價比高的蛋白表達系統(tǒng)。其中，K-12系列與B系列菌株是工業(yè)級生物工程中常用的大腸桿菌菌株。K-12菌株及其衍生的DH5α、Top10、JM109等菌株，可用于大規(guī)模生產(chǎn)質(zhì)粒DNA，進而制備細胞基因治療產(chǎn)品與病毒載體類疫苗；而源自B系列的菌株（如BL21），更適合高效轉(zhuǎn)染表達載體及常規(guī)蛋白的表達，例如病毒蛋白、重組蛋白疫苗、細胞因子、酶類等產(chǎn)品。湖州申科生物依據(jù)這兩種菌株的特性，分別研發(fā)了大腸桿菌表達菌HCP殘留檢測試劑盒與大腸桿菌克隆菌堿裂HCP殘留檢測試劑盒。
宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測對保障生物制品安全性和有效性至關重要。
宿主細胞殘留蛋白（HCP）檢測是生物制品質(zhì)量控制的關鍵環(huán)節(jié)，當前主流技術為基于抗體的免疫學方法（如 ELISA）。但實際檢測中，不同試劑盒的結(jié)果常存在明顯偏差，關鍵問題源于其兩大關鍵組分 ——HCP 校準品與檢測抗體 —— 在制備及表征上的高度可變性。作為定量基準的校準品，自身復雜性極高。不同供應商制備時，所用細胞來源、培養(yǎng)及表達條件存在明顯差異，且宿主蛋白的提取純化工藝（如目標產(chǎn)物去除策略）也各不相同，這些差異直接導致校準品的組成、對實際樣品的代表性及儲存穩(wěn)定性千差萬別。檢測抗體（尤其是多克隆抗體）需通過免疫動物獲得，其特異性與 HCP 覆蓋度受多重因素影響：免疫原的選擇、動物個體免疫應答差異、免疫方案設計，以及后續(xù)抗體篩選與純化流程，都會讓不同批次或來源的抗體，在對不同 HCP 的親和力、對低豐度蛋白的檢測靈敏度等識別譜特性上，形成本質(zhì)區(qū)別。
不同技術平臺獲得的抗體覆蓋率水平不一樣，一般覆蓋率水平從高到低依次IMBS-MS>IMBS-2D>2D-Western Blot。重組蛋白用宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測橋接驗證總蛋白檢測差異是 HCP 免疫檢測結(jié)果不同的原因之一。重組蛋白用宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測橋接驗證
中國倉鼠卵巢細胞（Chinese Hamster Ovary，CHO）是生物制品生產(chǎn)中常用的動物細胞表達系統(tǒng)，廣泛應用于抗體、重組蛋白、疫苗等產(chǎn)品的制備。采用 CHO 細胞作為宿主進行生產(chǎn)時，難免會引入宿主細胞蛋白（HCP）雜質(zhì)；即便 HCP 殘留量較低，仍可能存在免疫原性，還會帶來降低產(chǎn)品蛋白穩(wěn)定性等風險。因此，需對生物制品中的 HCP 殘留進行定量分析，從而保障純化工藝的一致性與終產(chǎn)品的安全性。SHENTEK®CHO 宿主細胞蛋白（HCP ）殘留檢測試劑盒實現(xiàn)了關鍵試劑的全國產(chǎn)化，其通過 CHO 細胞（K1&S）補料分批培養(yǎng)工藝制備 HCPs，再以此免疫綿羊獲取抗體，適用于檢測 CHO 細胞系表達的生物制品（如單抗、重組蛋白、疫苗等）中的 HCP 殘留。該試劑盒具有操作步驟少、檢測速度快、專一性強、性能穩(wěn)定可靠的特點。
重組蛋白用宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測橋接驗證
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