樣品中的高滲透性成分（如高濃度鹽、糖）會通過改變反應(yīng)體系滲透壓，抑制鱟試劑反應(yīng)，影響內(nèi)毒素檢測結(jié)果。例如，濃度為 70% 的葡萄糖溶液、高濃度氯化鈉溶液等，會形成高滲透壓環(huán)境，導(dǎo)致鱟試劑中的蛋白質(zhì)脫水變性，喪失酶活性，進而使內(nèi)毒素?zé)o法被正常檢測，出現(xiàn)假陰性。這類高滲透性基質(zhì)的干擾機制明確 —— 通過破壞蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)影響酶促反應(yīng)，且干擾程度與濃度正相關(guān)。為消除這類干擾，解決方案是使用內(nèi)毒素檢查用水稀釋樣品：根據(jù)樣品滲透性高低，逐步稀釋至適宜濃度（通常需稀釋至滲透壓與生理鹽水接近），降低對蛋白質(zhì)的脫水作用，恢復(fù)鱟試劑中酶的活性。稀釋過程中需注意，稀釋倍數(shù)需在方法驗證確定的 “無干擾稀釋范圍” 內(nèi)，避免因過度稀釋導(dǎo)致內(nèi)毒素濃度低于檢測限，確保內(nèi)毒素檢測既能規(guī)避高滲透性抑制，又能準(zhǔn)確捕捉微量內(nèi)毒素。

湖州申科生物細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（CSE）源自大腸桿菌（E.coli O111:B4），經(jīng)過提取精制獲得脂多糖，并以細(xì)菌內(nèi)毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品為基準(zhǔn)標(biāo)定效價，每支效價處于 10 - 100EU ，量值準(zhǔn)確且可靠。在工業(yè)內(nèi)毒素檢測中，該標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用廣且關(guān)鍵。首先，能用于鱟試劑靈敏度復(fù)核實驗，幫助檢測人員準(zhǔn)確確認(rèn)鱟試劑對細(xì)菌內(nèi)毒素的敏感程度，保障檢測方法的有效性；其次，可開展干擾試驗，評估樣品中可能存在的干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響，以便優(yōu)化檢測流程和方法；再者，能充當(dāng)各種陽性對照，為檢測過程提供參照，確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性與可靠性。這款標(biāo)準(zhǔn)品不僅適用于凝膠法鱟試劑系列實驗，在光度法鱟試劑系列實驗中同樣能發(fā)揮重要作用。使用時，只需參照中國藥典2025版第四部通則 1143 的相關(guān)介紹進行操作即可。憑借效價標(biāo)定準(zhǔn)確和適用性的優(yōu)勢，該標(biāo)準(zhǔn)品為生物制品、化學(xué)藥品等各類樣品的細(xì)菌內(nèi)毒素檢測提供了穩(wěn)定且可靠的標(biāo)準(zhǔn)，助力企業(yè)和檢測機構(gòu)嚴(yán)格把控產(chǎn)品質(zhì)量，滿足法規(guī)要求。

β- 葡聚糖是鱟試劑（LAL）檢測內(nèi)毒素的常見干擾物，可活化 LAL 中的 G 因子通路，導(dǎo)致假陽性結(jié)果。干擾多見于含植物源原料的樣品（如中藥注射劑）、生物發(fā)酵產(chǎn)物或環(huán)境真菌污染的樣品。消除方法包括：使用特異性 LAL 試劑（如添加葡聚糖抑制劑的 LAL），其只對內(nèi)毒素敏感而不受 β- 葡聚糖影響；采用加熱處理（如 80℃加熱 10 分鐘）破壞 β- 葡聚糖結(jié)構(gòu)；或通過親和層析去除樣品中的 β- 葡聚糖。檢測時需設(shè)置 β- 葡聚糖陽性對照，若對照反應(yīng)陽性而內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品無反應(yīng)，表明存在干擾，需優(yōu)化前處理步驟后重新檢測。

內(nèi)毒素檢測的實驗方案需遵循“標(biāo)曲可靠性驗證（靈敏度復(fù)核）-稀釋倍數(shù)計算-干擾試驗”的完整流程，以保障檢測結(jié)果準(zhǔn)確合規(guī)。首先進行標(biāo)曲可靠性試驗，用標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素制備至少3個濃度的稀釋液（相鄰濃度間稀釋倍數(shù)不超過10，下限濃度不低于鱟試劑標(biāo)示檢測限），每濃度設(shè) 3 支平行管，同時做2支陰性對照；當(dāng)陰性對照的吸光度小于或透光率大于標(biāo)準(zhǔn)曲線下限的檢測值或反應(yīng)時間大于標(biāo)準(zhǔn)曲線下限的反應(yīng)時間，對數(shù)據(jù)進行線性回歸，相關(guān)系數(shù)r的幅值≥0.980時試驗方有效，否則需重新操作。接著按公式 L=K/M 確定樣本內(nèi)毒素限值，K 值依給藥途徑而定，M結(jié)合人均60kg體重、1.62m2 體表面積及上限給藥劑量計算，也可參考藥典行標(biāo)。隨后明確有效稀釋上限倍數(shù)（MVD），即供試品允許稀釋的上限倍數(shù)，確保在此范圍內(nèi)檢測限值。再開展樣本干擾試驗，制備供試品溶液（A）、供試品加標(biāo)溶液（B，加標(biāo)濃度為標(biāo)曲中點）、標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液（C）及陰性對照（D），按公式 R=(Cs-Ct)/λm×100%計算加標(biāo)回收率，50%-200%為合格；若鱟試劑、生產(chǎn)工藝等發(fā)生變化，需重新進行干擾試驗，保障內(nèi)毒素檢測的可靠性。

內(nèi)毒素檢測結(jié)果誤差可能源于多環(huán)節(jié)：試劑方面，鱟試劑（LAL ）或試劑批間差異、過期試劑活性下降會導(dǎo)致結(jié)果偏差，需通過試劑驗收（如陽性對照回收率驗證）確保質(zhì)量；操作方面，實驗器具未除熱原（如玻璃器皿未干熱滅菌）、加樣體積不準(zhǔn)確會引入污染或誤差，需嚴(yán)格執(zhí)行 SOP（如器皿 250℃干熱滅菌≥30 分鐘）；環(huán)境方面，實驗室空氣中的微生物孢子、粉塵可能污染樣品，需在潔凈工作臺操作并設(shè)置陰性對照。此外，反應(yīng)溫度波動（偏離 37℃±1℃）會影響酶活性，需使用恒溫孵育器精確控溫，確保反應(yīng)條件穩(wěn)定。

當(dāng)實驗室更換內(nèi)毒素檢測方法或更換試劑供應(yīng)商時，需進行方法比對與橋接驗證。比對實驗需選取至少 3批代表性樣品，分別用新舊方法檢測，計算結(jié)果相關(guān)性（如相關(guān)系數(shù) R2≥0.95）和偏差（≤20%）。橋接驗證還需評估新方法的特異性、靈敏度是否與舊方法一致，如確認(rèn)對高風(fēng)險樣品（如含 β- 葡聚糖的樣品）的抗干擾能力相當(dāng)。若方法變更涉及法規(guī)申報產(chǎn)品，需將驗證數(shù)據(jù)納入申報資料，證明變更后方法仍能有效控制內(nèi)毒素風(fēng)險，符合 FDA、NMPA 等監(jiān)管機構(gòu)對方法變更的合規(guī)性要求。