低內(nèi)毒素回收（LER）的主要形成機(jī)制之一是螯合劑與非離子表面活性劑的協(xié)同作用，直接影響內(nèi)毒素檢測(cè)結(jié)果。第一步，樣品中的螯合劑（如檸檬酸鹽）會(huì)去除二價(jià)陽(yáng)離子（Mg2?、Ca2?），削弱 LPS 聚集體的鹽橋結(jié)構(gòu)，降低其剛性；第二步，表面活性劑（如吐溫 20）嵌入 LPS 分子，形成混合聚集體（膠體、層狀結(jié)構(gòu)），改變 LPS 的超分子形態(tài)。LPS 從 “可檢測(cè)態(tài)” 轉(zhuǎn)為 “不可檢測(cè)態(tài)”，導(dǎo)致鱟試劑中的 C 因子無(wú)法與內(nèi)毒素結(jié)合，內(nèi)毒素檢測(cè)出現(xiàn)假陰性。這種變化是時(shí)間依賴的，與稀釋度無(wú)關(guān)，給常規(guī)內(nèi)毒素檢測(cè)帶來(lái)獨(dú)特挑戰(zhàn)。

SHENTEK®重組級(jí)聯(lián)試劑為內(nèi)毒素檢測(cè)高效解決方案。法規(guī)層面，符合美國(guó)藥典（USP）、歐洲藥典（EP）及日本藥典（JP）要求，滿足國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)需求?？垢蓴_性強(qiáng)，與天然鱟具有相同反應(yīng)機(jī)制，檢測(cè)結(jié)果等效，適配復(fù)雜樣本場(chǎng)景。特異性表現(xiàn)突出，不含 G 因子，避免與 β - D 葡聚糖反應(yīng)產(chǎn)生假陽(yáng)性，保障結(jié)果可靠。檢測(cè)靈敏度高，線性范圍達(dá) 0.005 - 5EU/mL ，可準(zhǔn)確捕捉低濃度內(nèi)毒素。反應(yīng)快速，60分鐘內(nèi)即可完成檢測(cè)，提升檢測(cè)效率。兼容性佳，能兼容動(dòng)態(tài)顯色法的酶標(biāo)儀，無(wú)需額外投入設(shè)備成本。關(guān)鍵的是，無(wú)動(dòng)物源試劑，遵循 3R 原則（減少、替代、優(yōu)化），不依賴鱟血，解決資源依賴問(wèn)題，實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)期穩(wěn)定供應(yīng)。且通過(guò)重組表達(dá)生產(chǎn)，批次差異小，重復(fù)性好，穩(wěn)定性高，為生物制品、制藥等行業(yè)內(nèi)毒素檢測(cè)提供可靠、可持續(xù)的工具，助力企業(yè)把控質(zhì)量，契合綠色環(huán)保與高效檢測(cè)的雙重需求，在保障檢測(cè)準(zhǔn)確性與合規(guī)性的同時(shí)，推動(dòng)行業(yè)向更環(huán)保、更高效方向發(fā)展。

在內(nèi)毒素檢測(cè)的技術(shù)體系中，凝膠法與動(dòng)態(tài)顯色法基于不同原理與特性，形成互補(bǔ)應(yīng)用格局。凝膠法依托鱟試劑與內(nèi)毒素的凝集反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)定性或半定量檢測(cè)，其靈敏度覆蓋 0.03EU/ml、0.06EU/ml 等多梯度，60 分鐘即可完成反應(yīng)；檢測(cè)結(jié)果依賴肉眼觀察（180° 倒轉(zhuǎn)判讀凝膠形成），數(shù)據(jù)需手工記錄，配套 內(nèi)毒素凝膠法測(cè)定儀（恒溫儀） 即可開(kāi)展，雖自動(dòng)化程度有限，但操作簡(jiǎn)潔，適用于生產(chǎn)環(huán)節(jié)的快速初篩。與之相比，動(dòng)態(tài)顯色法通過(guò)監(jiān)測(cè)反應(yīng)混合物吸光度或透光率的變化（如達(dá)預(yù)設(shè)檢測(cè)值的反應(yīng)時(shí)間、信號(hào)增速）實(shí)現(xiàn) 定量檢測(cè) ，靈敏度拓展至 5-0.005EU/ml ，60-90 分鐘反應(yīng)時(shí)長(zhǎng)雖略長(zhǎng)，卻可借助酶標(biāo)儀或全自動(dòng)內(nèi)毒素檢測(cè)分析儀完成全流程自動(dòng)化操作—軟件實(shí)時(shí)采集數(shù)據(jù)，契合藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（GMP）對(duì)數(shù)據(jù)追溯與精度的要求。二者各有側(cè)重：凝膠法以 “快速定性” 服務(wù)基礎(chǔ)防控，動(dòng)態(tài)顯色法憑 “準(zhǔn)確定量 + 自動(dòng)化” 支撐嚴(yán)苛質(zhì)控，共同為內(nèi)毒素檢測(cè)提供靈活適配的技術(shù)路徑。

湖州申科重組級(jí)聯(lián)試劑（rCR）在關(guān)鍵性能指標(biāo)上表現(xiàn)優(yōu)異，滿足內(nèi)毒素檢測(cè)的嚴(yán)苛要求。靈敏度方面，其檢測(cè)范圍覆蓋 0.005-5EU/mL，可準(zhǔn)確捕捉微量?jī)?nèi)毒素殘留，適配基因治療、血液制品等低限值需求場(chǎng)景。標(biāo)準(zhǔn)曲線線性良好，R2≥0.990，確保定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。反應(yīng)效率上，rCR 只需 60 分鐘即可完成檢測(cè)，較部分競(jìng)品的 90-120 分鐘大幅縮短，提升檢測(cè)周轉(zhuǎn)效率?？垢蓴_性實(shí)驗(yàn)顯示，對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)輔料、300g/L 葡萄糖、FBS 血清、單抗等 8 類復(fù)雜樣品，rCR 在較低稀釋倍數(shù)下加標(biāo)回收率可達(dá) 70%-175.4%，優(yōu)于重組 C 因子法。批間一致性方面，多批次試劑檢測(cè)同一樣品的 CV 值≤15%，穩(wěn)定性遠(yuǎn)超行業(yè)平均水平，為長(zhǎng)期質(zhì)控提供可靠保障。

檢測(cè)細(xì)菌內(nèi)毒素的堂試劑方法，是一個(gè)生物反應(yīng)過(guò)程，受到很多因素的干擾。在一個(gè)供試品的檢測(cè)方法固定下來(lái)之前，為了得到準(zhǔn)確的結(jié)果，必須要了解供試品與鱟試劑之間的相互關(guān)系。供試品中的成分往往非常復(fù)雜，而且會(huì)干擾試驗(yàn)檢測(cè)系統(tǒng)的功能。很多干擾的機(jī)理，并不是非常清楚。但是業(yè)界比較能夠接受的理論是，如果供試品中某些因子影響了鱟試劑中蛋白的表達(dá)功能，則被認(rèn)為是干擾作用（Inhibition/Enhancement，V/E）。干擾作用產(chǎn)生的因素較多，一般包括試劑因素（鱟試劑、內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品）供試品因素（pH值、溫度、離子強(qiáng)度、濃度、水溶性、黏度、可發(fā)生鱟試劑反應(yīng)的非內(nèi)毒素雜質(zhì)）和實(shí)驗(yàn)因素（試驗(yàn)器皿、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水、鱟試劑抗干擾能力）等。

內(nèi)毒素檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)方案需遵循“標(biāo)曲可靠性驗(yàn)證（靈敏度復(fù)核）-稀釋倍數(shù)計(jì)算-干擾試驗(yàn)”的完整流程，以保障檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確合規(guī)。首先進(jìn)行標(biāo)曲可靠性試驗(yàn)，用標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素制備至少3個(gè)濃度的稀釋液（相鄰濃度間稀釋倍數(shù)不超過(guò)10，下限濃度不低于鱟試劑標(biāo)示檢測(cè)限），每濃度設(shè) 3 支平行管，同時(shí)做2支陰性對(duì)照；當(dāng)陰性對(duì)照的吸光度小于或透光率大于標(biāo)準(zhǔn)曲線下限的檢測(cè)值或反應(yīng)時(shí)間大于標(biāo)準(zhǔn)曲線下限的反應(yīng)時(shí)間，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行線性回歸，相關(guān)系數(shù)r的幅值≥0.980時(shí)試驗(yàn)方有效，否則需重新操作。接著按公式 L=K/M 確定樣本內(nèi)毒素限值，K 值依給藥途徑而定，M結(jié)合人均60kg體重、1.62m2 體表面積及上限給藥劑量計(jì)算，也可參考藥典行標(biāo)。隨后明確有效稀釋上限倍數(shù)（MVD），即供試品允許稀釋的上限倍數(shù)，確保在此范圍內(nèi)檢測(cè)限值。再開(kāi)展樣本干擾試驗(yàn)，制備供試品溶液（A）、供試品加標(biāo)溶液（B，加標(biāo)濃度為標(biāo)曲中點(diǎn)）、標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液（C）及陰性對(duì)照（D），按公式 R=(Cs-Ct)/λm×100%計(jì)算加標(biāo)回收率，50%-200%為合格；若鱟試劑、生產(chǎn)工藝等發(fā)生變化，需重新進(jìn)行干擾試驗(yàn)，保障內(nèi)毒素檢測(cè)的可靠性。