單核細(xì)胞活化反應(yīng)測(cè)定（MAT）是近年來(lái)熱原檢測(cè)領(lǐng)域的突破性技術(shù)，其原理基于人體免疫系統(tǒng)對(duì)熱原的天然應(yīng)答機(jī)制：人源單核細(xì)胞（如 THP-1 細(xì)胞系或新鮮人全血單核細(xì)胞）在熱原刺激下，會(huì)活化胞內(nèi)炎癥信號(hào)通路，釋放 IL-6、TNF-α 等促炎細(xì)胞因子，通過(guò) ELISA 檢測(cè)細(xì)胞因子的濃度，即可間接反映樣品中熱原的總量與活性。與傳統(tǒng)檢測(cè)方法相比，MAT 法具備三大不可替代的優(yōu)勢(shì)：一是廣譜性，可同時(shí)檢測(cè)細(xì)菌內(nèi)毒素、病毒、真菌毒素、支原體等所有類型熱原，填補(bǔ)了鱟試驗(yàn)法只能檢測(cè)內(nèi)毒素的 “非內(nèi)毒素?zé)嵩^(qū)”，尤其適用于疫苗、基因治療產(chǎn)品等易受多種熱原污染的高風(fēng)險(xiǎn)產(chǎn)品；二是人源相關(guān)性，采用與人體同源的細(xì)胞模型，檢測(cè)結(jié)果更貼近臨床實(shí)際熱原反應(yīng)，避免家兔試驗(yàn)中動(dòng)物種屬差異導(dǎo)致的誤判；三是高靈敏度，對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測(cè)限可達(dá) 0.0125EU/mL，對(duì)非內(nèi)毒素?zé)嵩ㄈ缃湍付嗵?、腺病毒）的檢測(cè)限低至 ng/pg 級(jí)，滿足低限值產(chǎn)品的質(zhì)控需求。

家兔熱原試驗(yàn)作為熱原檢測(cè)領(lǐng)域的 “法定傳統(tǒng)方法”，被中國(guó)藥典（ChP）、美國(guó)藥典（USP）、歐洲藥典（EP）均列為法定檢測(cè)項(xiàng)目，其主要優(yōu)勢(shì)在于可通過(guò)家兔體溫應(yīng)答篩查所有類型熱原，尤其適用于無(wú)法排除非內(nèi)毒素?zé)嵩廴镜母唢L(fēng)險(xiǎn)產(chǎn)品，如血液制品、放射性質(zhì)藥物及部分生物制劑。然而，家兔熱原試驗(yàn)存在明顯局限：動(dòng)物個(gè)體差異大，需額外投入時(shí)間與成本篩選合格家兔；檢測(cè)周期長(zhǎng)（至少 6 小時(shí)），無(wú)法滿足生物制品快速放行需求；靈敏度較低（對(duì) LPS 檢測(cè)限≥5EU/kg），與全球倡導(dǎo)的“動(dòng)物福利3R原則”背道而馳。

MAT 法熱原檢測(cè)中，細(xì)胞傳代的代次控制是保障檢測(cè)穩(wěn)定性的關(guān)鍵，需結(jié)合細(xì)胞特性與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)制定標(biāo)準(zhǔn)。參考行業(yè)文獻(xiàn)，單核細(xì)胞系（如 HL-60、THP1）的使用代次通常不超過(guò) 20 代，代次過(guò)高會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞生物學(xué)特性改變：一是 TLR 受體表達(dá)下降，如 TLR4 表達(dá)量在 20 代后下降 40%，導(dǎo)致內(nèi)毒素檢測(cè)靈敏度降低；二是細(xì)胞倍增時(shí)間延長(zhǎng)，從 24 小時(shí)延長(zhǎng)至 36 小時(shí)，影響共培養(yǎng)時(shí)長(zhǎng)的準(zhǔn)確性；三是炎癥因子分泌減少，IL-6 分泌量在 20 代后下降 35%，導(dǎo)致熱原濃度低估。申科對(duì)配套的 HL-60 細(xì)胞系進(jìn)行代次穩(wěn)定性驗(yàn)證，結(jié)果顯示：1-15 代細(xì)胞的熱原響應(yīng)性一致（加標(biāo)回收率 85%-125%），16-20 代回收率波動(dòng)至 70%-130%，21 代后回收率 < 70%，因此建議控制在 1-15 代使用。實(shí)驗(yàn)室需建立細(xì)胞代次記錄制度，每傳代 1 次記錄代次，達(dá)到 15 代后及時(shí)更換新批次細(xì)胞，并驗(yàn)證新批次細(xì)胞與舊批次的一致性（如檢測(cè)同一樣品，結(jié)果偏差≤20%），確保不同代次細(xì)胞的檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定。

湖州申科生物熱原檢測(cè)（MAT法） 試劑盒在靈敏度、穩(wěn)定性與適用性上表現(xiàn)突出，關(guān)鍵性能參數(shù)符合藥典要求：標(biāo)曲線性范圍 0.0125-1.0EU/mL，相關(guān)系數(shù) R2≥0.98，定量限 0.025EU/mL，檢測(cè)限（LOD）0.0125EU/mL，批間精密度 CV≤25%，可準(zhǔn)確捕捉微量熱原。其優(yōu)勢(shì)在于特定的單核細(xì)胞系 —— 與依賴供體血液的 PBMC 細(xì)胞不同，申科 MAT 細(xì)胞系來(lái)源清晰可溯源，無(wú)需倫理審批與血站合作，規(guī)避供體差異導(dǎo)致的檢測(cè)波動(dòng)。對(duì)比同類型產(chǎn)品（如國(guó)外廠家 PBMC 細(xì)胞），申科細(xì)胞系的標(biāo)曲各濃度點(diǎn) CV 更低（ 低至3.6%）、相對(duì)偏差更?。?nbsp;12.31%），線性 R2 達(dá) 1.000，穩(wěn)定性更優(yōu)。此外，細(xì)胞凍存液組分經(jīng)優(yōu)化，復(fù)蘇后活率高，無(wú)需額外調(diào)整細(xì)胞狀態(tài)即可直接與供試品共孵育，操作便捷；且適配任何具備 450nm 波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀，無(wú)需專門的設(shè)備，降低實(shí)驗(yàn)室投入成本。

MAT 法與傳統(tǒng)家兔法在熱原檢測(cè)中，性能差異明顯，MAT 法在準(zhǔn)確性、效率與合規(guī)性上更具優(yōu)勢(shì)。從結(jié)果評(píng)判來(lái)看，MAT 法以 “加標(biāo)回收率 50%-200%、供試品濃度 < 規(guī)定限值（CLC）” 為合格標(biāo)準(zhǔn)，靈敏度達(dá) 0.0125EU/mL，可準(zhǔn)確定量熱原濃度；而家兔法只能定性（觀察體溫升高），靈敏度低（約 0.1-0.5EU/mL），易因家兔個(gè)體差異（如免疫狀態(tài)、應(yīng)激反應(yīng)）導(dǎo)致假陰性。從檢測(cè)效率來(lái)看，MAT 法樣品與細(xì)胞共培養(yǎng) 24 小時(shí)即可出結(jié)果，且可批量檢測(cè)（96 孔板一次處理多個(gè)樣品）；家兔法需連續(xù)觀察 72 小時(shí)，每次只能檢測(cè)少量樣品，耗時(shí)且人力成本高。從合規(guī)性來(lái)看，MAT 法不使用動(dòng)物，符合 3R 原則，已被歐盟接受（EP 刪除家兔法）；家兔法因動(dòng)物實(shí)驗(yàn)屬性，面臨歐盟等地區(qū)的法規(guī)限制。此外，MAT 法重復(fù)性優(yōu)（復(fù)孔 CV 可控制在 30% 以內(nèi)），家兔法因個(gè)體差異 CV 常超 50%，進(jìn)一步凸顯 MAT 法在現(xiàn)代熱原檢測(cè)中的優(yōu)勢(shì)。

歐盟在熱原檢測(cè)方法選擇上，以動(dòng)物保護(hù)和檢測(cè)準(zhǔn)確性為導(dǎo)向，形成明確的法規(guī)傾向。首先，歐盟禁止家兔法（PRT 法）這類動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，要求采用替代方法，單核細(xì)胞活化試驗(yàn)（MAT 法）因符合 3R 原則（替代、減少、優(yōu)化），被納入歐洲藥典（EP2.6.30），成為熱原檢測(cè)的主流替代方法。其次，對(duì)于鱟試劑法，歐盟雖未禁止（因其屬于鱟血提取而非動(dòng)物實(shí)驗(yàn)），但出于鱟資源保護(hù)考量，推薦使用重組 C 因子法（EP2.6.32），該方法無(wú)需依賴鱟血，通過(guò)基因工程技術(shù)制備試劑，避免資源衰減與生態(tài)爭(zhēng)議。此外，美國(guó)藥典（USP）和日本藥典（JP）也同步推薦重組試劑（含重組級(jí)聯(lián)試劑 rCR），形成國(guó)際法規(guī)協(xié)同趨勢(shì)。需注意的是，歐盟對(duì)熱原檢測(cè)的要求是 “重點(diǎn)全場(chǎng)景覆蓋致熱物質(zhì)”，MAT 法因能同時(shí)檢測(cè)內(nèi)毒素與非內(nèi)毒素?zé)嵩?，重組 C 因子法因特異性高（無(wú) G 因子干擾），均符合其法規(guī)邏輯，而傳統(tǒng)鱟試劑法需額外關(guān)注 β- 葡聚糖假陽(yáng)性問(wèn)題，復(fù)雜基質(zhì)樣品需加做干擾驗(yàn)證。