上海合規(guī)性熱原檢測技術(shù)升級
來源：
發(fā)布時間：2025-10-05
生物制品（如單克隆抗體、重組蛋白、細胞因子）因基質(zhì)成分復(fù)雜（含高濃度蛋白質(zhì)、螯合劑、表面活性劑、緩沖鹽等），在熱原檢測過程中易出現(xiàn)“反應(yīng)抑制”或“非特異性增強”現(xiàn)象，嚴重影響檢測結(jié)果準確性。選擇抗干擾能力更強的檢測方法至關(guān)重要，重組級聯(lián)試劑（rCR）因采用完整級聯(lián)反應(yīng)路徑，抗干擾性優(yōu)于天然 LAL；單核細胞活化反應(yīng)測定（MAT）對復(fù)雜基質(zhì)耐受性更高，通過適當稀釋即可消除多數(shù)干擾，因此生物制品熱原檢測常采用 “rCR 法（內(nèi)毒素定量）+ MAT 法（全熱原篩查）” 的聯(lián)合方案，既保證內(nèi)毒素檢測的準確性，又防控非內(nèi)毒素熱原風險。
熱原檢測MAT法可在96孔板中批量檢測，單批次實驗1.5天即可放行，家兔法需3-7天。上海合規(guī)性熱原檢測技術(shù)升級
PBMC（外周血單個核細胞）用于 MAT 熱原檢測時，存在異質(zhì)性與血源供應(yīng)兩大關(guān)鍵問題。從異質(zhì)性來看，PBMC 含 12% 單核細胞與 88% 淋巴細胞，且來自不同供體，細胞組成、功能狀態(tài)及熱原反應(yīng)存在明顯差異，導(dǎo)致熱原刺激后 IL-6 釋放量波動大，標準化難度高。血源供應(yīng)方面，除受獻血者數(shù)量、時間及采集血液政策限制外，EP2.6.30 還要求嚴格檢測乙肝、丙肝等標志物，且采集血液、處理、試劑制備全程需無菌操作，流程環(huán)節(jié)多、復(fù)雜度高，遠不及單核細胞系制備簡便，易影響熱原檢測的時效性與穩(wěn)定性。江蘇醫(yī)療器械熱原檢測規(guī)范基于人體免疫機制的 MAT 熱原檢測，為熱原檢測提供了新的可靠途徑。
基于單核細胞系的穩(wěn)定性，MAT 熱原檢測可將復(fù)孔數(shù)從藥典要求的≥4 降至≥3。PyroSHENTEK®熱原檢測試劑盒數(shù)據(jù)顯示，單核細胞系標曲的 4 復(fù)孔與 3 復(fù)孔，各濃度點（0.0125-1.0EU/mL）的準確度（相對偏差）與精密度均在標準范圍內(nèi)，無明顯差異。這一調(diào)整的主要依據(jù)是單核細胞系消除了 PBMC 的異質(zhì)性，無需依賴多復(fù)孔抵消波動，既能滿足熱原檢測的穩(wěn)定性與統(tǒng)計學(xué)合理性要求，又能減少試劑與耗材消耗，降低檢測成本，同時提升實驗效率。因此樣品預(yù)測試時可選擇3復(fù)孔進行初步檢測，產(chǎn)品放行還需按照藥典要求進行4復(fù)孔測試。
PBMC（外周血單個核細胞）的復(fù)雜制備流程嚴重制約熱原檢測效率。首先，血源獲取受獻血者數(shù)量、時間及采集血液政策限制，無法按需即時獲??；其次，需嚴格執(zhí)行 EP2.6.30 規(guī)定的標志物檢測，增加前期準備時間；再進行采集血液、分離單核細胞、凍存等環(huán)節(jié)需全程無菌操作，步驟繁瑣且易引入污染風險。相比之下，單核細胞系可工業(yè)化培養(yǎng)，制備流程簡單可控，能快速提供合格細胞，避免因 PBMC 制備延誤熱原檢測進度，更適配批量樣品的高效質(zhì)控。熱原檢測技術(shù)百年演進，關(guān)鍵驅(qū)動力是靈敏度、速度與動物福利的平衡。
隨著發(fā)熱反應(yīng)分子機制研究的不斷深化，單核細胞活化試驗（MAT）作為一種體外熱原檢測技術(shù)，愈發(fā)受到醫(yī)藥與醫(yī)療器械行業(yè)的關(guān)注并逐步推廣應(yīng)用。該方法的原理是：讓人體全血與待檢樣品中的熱原充分接觸后，通過檢測體系中產(chǎn)生的 IL-1β、IL-6（因穩(wěn)定性強、重復(fù)性優(yōu)，常作為關(guān)鍵檢測指標）、TNF 等促炎細胞因子含量，實現(xiàn)對熱原污染程度的評估，整個過程能高度模擬人體先天免疫系統(tǒng)對熱原的應(yīng)答反應(yīng)。相較于傳統(tǒng)熱原檢測手段，MAT 的優(yōu)勢更為突出：不僅可檢出各類熱原污染物，包括尚未明確性質(zhì)的未知熱原，以及革蘭氏陽性菌（脂磷壁酸）、真菌、病毒等產(chǎn)生的非內(nèi)毒素熱原，填補了傳統(tǒng)內(nèi)毒素檢測（如鱟試劑法）的覆蓋空白。此外，MAT 無需使用實驗動物，契合全球 “替代、減少、優(yōu)化”（3R 原則）的監(jiān)管導(dǎo)向，目前已被《歐洲藥典》等法規(guī)列為家兔熱原試驗的替代方法，進一步提升了其在合規(guī)檢測中的適用性。
湖州申科熱原檢測試劑盒（MAT）的單核細胞系無供體依賴性，解決PBMC因免疫狀態(tài)差異的結(jié)果波動。原料藥熱原檢測流程家兔法是熱原檢測 “金標準”，但操作繁瑣、耗時且需動物設(shè)施，存在明顯局限。上海合規(guī)性熱原檢測技術(shù)升級
MAT法熱原檢測出現(xiàn) “無信號”，需從試劑、實驗操作、儀器三方面定位原因并解決。試劑層面，抗體不足或失活會導(dǎo)致無法捕獲 IL-6，需核對抗體稀釋比例，檢查保存條件（如 2-8℃）與有效期，必要時更換試劑；底物失效（如變色、沉淀）會無法顯色，需觀察底物外觀，失效則更換；混合不同試劑盒試劑會因成分不匹配導(dǎo)致反應(yīng)失敗，需使用同試劑盒試劑；ELISA 試劑盒保存不當（如反復(fù)凍融）會破壞試劑活性，需按說明書分條件保存（如抗體 2-8℃、底物避光）。實驗操作中，孵育溫度過低（<37℃）會抑制酶促反應(yīng)，需提前將試劑與孔板平衡至室溫，確保孵育溫度達標；洗板機壓力過高或手動洗滌過猛，會洗去結(jié)合的抗體與酶，需調(diào)整洗板機壓力或輕柔手動洗滌；孵育時孔板未密封導(dǎo)致孔變干，會使反應(yīng)體系破壞，需用封口膜密封孔板。儀器方面，洗板機噴頭堵塞會導(dǎo)致洗滌不均或未洗，需清理噴頭；酶標儀波長設(shè)置錯誤（未選 450nm）會無法檢測信號，需確認波長設(shè)置正確。
上海合規(guī)性熱原檢測技術(shù)升級
下一篇：
江蘇疫苗熱原檢測結(jié)果判定
相關(guān)新聞
- 天津熱原檢測風險評估 2025-10-20
- 江蘇HEK293宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測試劑盒 2025-10-20
- 上海重組蛋白內(nèi)毒素檢測抗干擾方案 2025-10-20
- 疫苗熱原檢測技術(shù)服務(wù) 2025-10-20
- 上海非動物源內(nèi)毒素檢測法規(guī)要求 2025-10-20
- 江蘇細胞基因治療產(chǎn)品用宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測橋接驗證 2025-10-20
- 北京疫苗熱原檢測單核細胞活化反應(yīng)測定法 2025-10-20
- 湖南宿主細胞殘留DNA檢測 2025-10-20
- 北京原料藥熱原檢測法規(guī)要求 2025-10-20
- 山西熱原檢測歐盟出口方案 2025-10-20
推薦新聞
- 楊浦區(qū)在線信息系統(tǒng)集成服務(wù)電話 2025-10-20
- 江西哪家強面部項目儀器代理價格 2025-10-20
- 上海黍峰生物病害檢測葉綠素熒光儀定制 2025-10-20
- 深圳耐污涂層案例 2025-10-20
- 蘇州10ml血清移液管工廠直銷 2025-10-20
- 北京保健養(yǎng)生茶怎么搭配 2025-10-20
- 遼寧哪里有病理切片銷售 2025-10-20
- 銀川安裝奧托博克仿生假肢 2025-10-20
- 奉賢區(qū)便宜的吻合器專賣店 2025-10-20
- 金山區(qū)好的加熱絲回路工廠直銷 2025-10-20