內(nèi)毒素檢測常與熱原檢測混淆，二者既有關(guān)聯(lián)又有區(qū)別：熱原是指所有能引起發(fā)熱的物質(zhì)（包括內(nèi)毒素、病毒、真菌等），通過傳統(tǒng)家兔熱原試驗(yàn)檢測；內(nèi)毒素是熱原的主要成分（占 90% 以上），檢測更具特異性。目前，家兔熱原試驗(yàn)因操作復(fù)雜、動(dòng)物成本高，已逐漸被單核細(xì)胞活化反應(yīng)測定法（MAT）替代，但部分產(chǎn)品（如放射性質(zhì)藥物、血液制品）仍需保留家兔試驗(yàn)作為補(bǔ)充。法規(guī)要求內(nèi)毒素檢測結(jié)果需與熱原風(fēng)險(xiǎn)關(guān)聯(lián)，若內(nèi)毒素檢測合格但臨床出現(xiàn)熱原反應(yīng)，需排查是否存在非內(nèi)毒素類熱原，通過聯(lián)合檢測確保產(chǎn)品安全性。

內(nèi)毒素檢測鱟試劑的反應(yīng)受pH的干擾。在進(jìn)行檢測時(shí)，要調(diào)節(jié)被測溶液的pH值，使鱟試劑與供試品溶液的混合溶液pH值落在鱟試劑指定的使用pH范圍內(nèi)（一般鱟試劑作用pH值在6.0~8.0范圍內(nèi))。用于調(diào)節(jié)pH值的試液或溶液（酸或堿)，可采用BET用水配制，并將溶液在無熱原容器中儲(chǔ)存；必須對試液或溶液進(jìn)行驗(yàn)證，以證明不含可檢出的內(nèi)毒素并且無干擾因素。調(diào)節(jié)pH試劑（酸或堿）的添加量，不應(yīng)該超過供試品的1092。如果超過10%，則在進(jìn)行計(jì)算時(shí)，將DH試劑的添加量的系數(shù)計(jì)算進(jìn)去。

在開展內(nèi)毒素檢測時(shí)，樣品的 pH 值與二價(jià)離子（Mg2?、Ca2?）水平是影響鱟試劑酶促反應(yīng)的關(guān)鍵因素，直接關(guān)系檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。鱟試劑檢測內(nèi)毒素依賴絲氨酸蛋白酶的級(jí)聯(lián)放大反應(yīng)，該反應(yīng)的合適 pH 值范圍為 6.0-8.0，若樣品過酸或過堿，會(huì)快速降低酶活性，甚至導(dǎo)致酶徹底失活，進(jìn)而出現(xiàn)內(nèi)毒素檢測假陰性。針對這一問題，可使用 0.1N 或更低濃度的 HCl/NaOH 溶液，將樣品 pH 值準(zhǔn)確調(diào)節(jié)至適宜區(qū)間，為反應(yīng)提供穩(wěn)定環(huán)境。同時(shí)，二價(jià)離子是反應(yīng)必需的輔助因子：Mg2?是內(nèi)毒素活化鱟試劑的關(guān)鍵，缺乏會(huì)直接阻斷反應(yīng)啟動(dòng)；Ca2?雖參與酶促反應(yīng)，但濃度過高會(huì)反向抑制反應(yīng)效率。若樣品中含有肝素鈉、EDTA、檸檬酸鈉等螯合劑，會(huì)與二價(jià)離子結(jié)合導(dǎo)致其濃度不足，此時(shí)可通過內(nèi)毒素檢查用水稀釋樣品降低螯合劑濃度，或添加特定二價(jià)離子試劑補(bǔ)充，但需嚴(yán)格控制離子濃度，避免過度增強(qiáng)反應(yīng)引發(fā)誤差，確保內(nèi)毒素檢測能真實(shí)反映樣品中的內(nèi)毒素殘留量。

湖州申科針對 LER 提供多平臺(tái)內(nèi)毒素檢測解決方案，適配不同成因的 LER 問題：一是鱟試劑配套增強(qiáng)劑，通過添加分散劑、過量二價(jià)陽離子，改善 LPS 聚集體狀態(tài)，提升回收率；二是重組鱟試劑（rCR），無 G 因子干擾，完全模擬天然鱟級(jí)聯(lián)反應(yīng)，靈敏度達(dá) 0.005EU/mL，易與天然方法橋接；三是重組 C 因子（rFC），靈敏度 0.005-5EU/mL，性狀穩(wěn)定，適配特定基質(zhì)；四是 單核細(xì)胞活化反應(yīng)測定（MAT)法，通過檢測 IL-6 覆蓋全熱原，不受 LPS 結(jié)構(gòu)變化影響；五是質(zhì)譜技術(shù)，驗(yàn)證基質(zhì)殘留對檢測的干擾。多平臺(tái)協(xié)同確保內(nèi)毒素檢測準(zhǔn)確可靠。

內(nèi)毒素檢測重組級(jí)聯(lián)試劑（rCR）與天然鱟試劑在原料、性能和可持續(xù)性上存在本質(zhì)區(qū)別。原料方面，天然鱟試劑依賴鱟血采集，受動(dòng)物資源限制，而 rCR 通過基因工程表達(dá) C、B 因子及凝固酶原，無動(dòng)物源性，供應(yīng)穩(wěn)定。特異性上，天然鱟試劑因含 G 因子，易與 β-D 葡聚糖反應(yīng)產(chǎn)生假陽性，而 rCR 剔除 G 因子，只對內(nèi)毒素特異性響應(yīng)，從機(jī)制上消除干擾。批間一致性方面，天然鱟試劑受鱟個(gè)體差異影響，批間 CV 值較高；rCR 成分明確且生產(chǎn)工藝標(biāo)準(zhǔn)化，批間差異明顯降低，CV 值≤15%。兩者靈敏度相當(dāng)（0.005EU/mL），但 rCR 無需面臨鱟資源政策限制，更符合動(dòng)物福利趨勢和長期質(zhì)控需求，是天然鱟試劑的理想替代。

內(nèi)毒素檢測方法易受樣品基質(zhì)干擾，法規(guī)要求在方法應(yīng)用前必須進(jìn)行干擾驗(yàn)證，選擇標(biāo)準(zhǔn)曲線中點(diǎn)或一個(gè)靠近中點(diǎn)的內(nèi)毒素濃度，作為供試品干擾試驗(yàn)種添加的內(nèi)毒素濃度計(jì)算回收率，若回收率在 50%-200% 范圍內(nèi)，表明無明顯干擾；若回收率異常，需通過過濾、中和、透析、加熱處理等方式優(yōu)化樣品前處理。方法學(xué)確認(rèn)還需涵蓋線性范圍（如 0.005-5 EU/mL）、精密度（批內(nèi) CV≤15%）、檢測限（LOD≤0.01 EU/mL）等指標(biāo)，確保方法在實(shí)際樣品檢測中穩(wěn)定可靠，符合《美國藥典》 <85>、《中國藥典》通則 1143 等藥典要求。