MAT 試劑盒配套的即用型細(xì)胞存在明確的傳代限制，且商業(yè)化傳代需獲得授權(quán)，關(guān)鍵是保障細(xì)胞質(zhì)量與檢測(cè)可靠性。首先，即用型細(xì)胞經(jīng)特殊工藝優(yōu)化，已處于較好的活性與熱原響應(yīng)狀態(tài)，不適合傳代，傳代后細(xì)胞會(huì)出現(xiàn) TLR 受體表達(dá)下降、炎癥因子分泌減少等問(wèn)題，導(dǎo)致熱原檢測(cè)靈敏度降低，如 HL-60 細(xì)胞傳代超過(guò) 5 代后，IL-6 分泌量下降 30%，無(wú)法滿足檢測(cè)要求。其次，若用戶需將即用型細(xì)胞用于商業(yè)化生產(chǎn)（如大規(guī)模檢測(cè)），需獲得湖州申科授權(quán)，包括用戶資質(zhì)審核、技術(shù)培訓(xùn)、傳代方案驗(yàn)證，確保用戶具備細(xì)胞培養(yǎng)與質(zhì)量控制能力，避免未經(jīng)授權(quán)傳代導(dǎo)致細(xì)胞特性改變，影響檢測(cè)結(jié)果一致性。此外，參考文獻(xiàn)數(shù)據(jù)，即使是可傳代的單核細(xì)胞系，使用代次也不超過(guò) 20 代，超過(guò)后代次細(xì)胞穩(wěn)定性差，因此即用型細(xì)胞設(shè)計(jì)為 “一次性使用”，從源頭避免傳代帶來(lái)的風(fēng)險(xiǎn)。用戶需嚴(yán)格遵守傳代限制，若需長(zhǎng)期使用，建議定期采購(gòu)新批次試劑盒，確保細(xì)胞質(zhì)量。

MAT 法熱原檢測(cè)標(biāo)曲采用非倍比稀釋，而非 1-0.5-0.25 的倍比稀釋，主要優(yōu)勢(shì)在于提升標(biāo)曲準(zhǔn)確性與適用性，避免稀釋誤差影響。一是可密集覆蓋關(guān)鍵濃度區(qū)間：熱原檢測(cè)的重點(diǎn)關(guān)注區(qū)為低濃度拐點(diǎn)（如 0.0125-0.1EU/mL）與高濃度平臺(tái)區(qū)（如 0.5-1EU/mL），非倍比稀釋可在這些區(qū)間設(shè)置更多濃度點(diǎn)（如 0.0125、0.025、0.05、0.1、0.25、0.5、1EU/mL），提升曲線擬合精度，而倍比稀釋低濃度點(diǎn)少，易導(dǎo)致低濃度熱原定量不準(zhǔn)。二是降低稀釋誤差累積：倍比稀釋需連續(xù)稀釋（如 1EU/mL→0.5EU/mL→0.25EU/mL），每一步誤差會(huì)累積，導(dǎo)致低濃度點(diǎn)實(shí)際濃度偏離理論值；非倍比稀釋通過(guò)單獨(dú)配制每個(gè)濃度點(diǎn)（如直接用標(biāo)準(zhǔn)品配制 0.025EU/mL），避免誤差累積，提升標(biāo)曲可靠性。三是適配不同樣品濃度：非倍比稀釋可根據(jù)樣品預(yù)期濃度調(diào)整標(biāo)曲范圍，如樣品預(yù)期濃度 0.05EU/mL，可增加 0.025、0.05、0.1EU/mL 點(diǎn)，確保樣品濃度落在標(biāo)曲線性區(qū)，而倍比稀釋范圍固定，靈活性差。這些優(yōu)勢(shì)使非倍比稀釋成為 MAT 法標(biāo)曲配制的優(yōu)先選擇方式。

生物制品（如單克隆抗體、重組蛋白、細(xì)胞因子）因基質(zhì)成分復(fù)雜（含高濃度蛋白質(zhì)、螯合劑、表面活性劑、緩沖鹽等），在熱原檢測(cè)過(guò)程中易出現(xiàn)“反應(yīng)抑制”或“非特異性增強(qiáng)”現(xiàn)象，嚴(yán)重影響檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性。選擇抗干擾能力更強(qiáng)的檢測(cè)方法至關(guān)重要，重組級(jí)聯(lián)試劑（rCR）因采用完整級(jí)聯(lián)反應(yīng)路徑，抗干擾性優(yōu)于天然 LAL；單核細(xì)胞活化反應(yīng)測(cè)定（MAT）對(duì)復(fù)雜基質(zhì)耐受性更高，通過(guò)適當(dāng)稀釋即可消除多數(shù)干擾，因此生物制品熱原檢測(cè)常采用 “rCR 法（內(nèi)毒素定量）+ MAT 法（全熱原篩查）” 的聯(lián)合方案，既保證內(nèi)毒素檢測(cè)的準(zhǔn)確性，又防控非內(nèi)毒素?zé)嵩L(fēng)險(xiǎn)。

PyroSHENTEK^®熱原檢測(cè)試劑盒（貨號(hào) 1502100，規(guī)格 96 測(cè)試 / 盒）優(yōu)勢(shì)在于搭載 MAT 特定單核細(xì)胞系，細(xì)胞表面表達(dá)多種 Toll 樣受體（TLR），可響應(yīng)不同類型熱原。該細(xì)胞系來(lái)源清晰、可溯源，均一性強(qiáng)且無(wú)供體依賴，有效規(guī)避了傳統(tǒng) PBMC 因供體差異導(dǎo)致的結(jié)果波動(dòng)，同時(shí)安全風(fēng)險(xiǎn)低，無(wú)需擔(dān)憂外源因子污染。試劑盒采用 “標(biāo)準(zhǔn)化單核細(xì)胞 + ELISA 檢測(cè)” 一體化體系，通過(guò)嚴(yán)格的細(xì)胞質(zhì)量控制（如凍存復(fù)融后活率達(dá)標(biāo)），確保每次檢測(cè)的細(xì)胞狀態(tài)一致；搭配預(yù)包被 IL-6 抗體的酶標(biāo)板與配套試劑，進(jìn)一步減少體系誤差。從標(biāo)曲數(shù)據(jù)來(lái)看，其擬合采用 4-Parameter Logistic 模型，R2 達(dá) 1.000，EC50 為 0.119EU/mL，參數(shù)置信區(qū)間穩(wěn)定，復(fù)孔結(jié)果重復(fù)性優(yōu)異，能為熱原定量提供準(zhǔn)確如一的數(shù)據(jù)支撐，避免因體系不穩(wěn)定導(dǎo)致的檢測(cè)偏差。

在 MAT 法熱原檢測(cè)中，PBMC（外周血單核細(xì)胞）與單核細(xì)胞系各有優(yōu)劣，單核細(xì)胞系更適合標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)。PBMC 的優(yōu)勢(shì)在于免疫細(xì)胞成分豐富（含單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等），對(duì)熱原反應(yīng)敏感，靈敏度相對(duì)較高；但局限同樣明顯 ——PBMC 需從不同供體獲取，供體免疫狀態(tài)差異會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不穩(wěn)定，且無(wú)法長(zhǎng)期保存，難以建立標(biāo)準(zhǔn)化方法學(xué)。單核細(xì)胞系（如 HL-60、MM6、THP1）則克服了 PBMC 的局限：細(xì)胞來(lái)源穩(wěn)定（可批量培養(yǎng)），TLR 受體表達(dá)覆蓋主要亞型（如 HL-60 表達(dá) TLR1-TLR9），對(duì)熱原反應(yīng)重復(fù)性好，更適合商業(yè)化試劑盒與法規(guī)檢測(cè)。不同單核細(xì)胞系性能也有差異：MM6/IL-6 法檢測(cè)限約 0.05EU/mL，THP1/TNF-α 法因 TNF-α 為一級(jí)免疫效應(yīng)物檢測(cè)限更低，但 TNF-α 穩(wěn)定性差；HL-60/IL-6 法檢測(cè)限與穩(wěn)定性均優(yōu)于前兩者，成為主流選擇。湖州申科生物MAT試劑盒選用 HL-60 細(xì)胞系，正是基于其優(yōu)異的穩(wěn)定性與熱原響應(yīng)適配多場(chǎng)景，確保不同批次檢測(cè)結(jié)果一致。