無細胞蛋白表達技術（CFPS）根據反應體系的設計可分為分批式（Batch）、雙層式（Bilayer）和連續(xù)交換式（CECF）三種主要形式。分批式是Zui基礎的形式，反應在單一試管中進行，操作簡單但受限于底物耗盡和副產物積累，表達時間通常只4小時，適合小規(guī)模篩選（如Promega的試劑盒）。雙層式通過密度差異將反應液與緩沖液分層，延長反應時間至8-20小時，日本CFS公司的產品采用此設計。連續(xù)交換式（CECF）通過半透膜連接反應室與供應室，持續(xù)補充底物并移除副產物，可將反應延長至24小時，產量明顯提高（如德國RTS系統(tǒng)的1mL及以上規(guī)模產品）隨著工程化裂解物與自動化設備的進步，體外蛋白表達技術將成為生命科學工具箱中的常備利器。差異蛋白表達陰性

體外蛋白表達技術的重點在于利用細胞裂解物中的生物合成機器（核糖體、tRNA、翻譯因子）在試管中直接合成蛋白質。以大腸桿菌系統(tǒng)為例：首先制備含T7啟動子的線性DNA模板，將其與商業(yè)化裂解物（如RocheRTS100）、能量混合物（ATP/GTP）及20種氨基酸混合，在37℃振蕩反應2-4小時即可完成蛋白表達。整個過程無需細胞培養(yǎng)與基因轉染，速度比傳統(tǒng)方法快10倍以上。例如，COVID19刺突蛋白RBD結構域的體外表達只需6小時，而HEK293細胞系統(tǒng)需5天。該技術的關鍵優(yōu)勢是開放體系的可編程性——可直接添加非天然氨基酸（如Azidohomoalanine）合成定制化蛋白，為藥物偶聯(lián)物開發(fā)提供高效平臺。差異蛋白表達陰性大腸桿菌裂解物的??高翻譯效率??可支持??100μg/mL級??蛋白產量，但缺乏糖基化修飾能力。

從裂解物來源看，無細胞蛋白表達技術主要分為原核系統(tǒng)和真核系統(tǒng)。原核系統(tǒng)以大腸桿菌S30提取物為主，成本低、耐受性強，適合表達簡單蛋白或引入非天然氨基酸，但缺乏復雜翻譯后修飾能力。真核系統(tǒng)包括兔網織紅細胞裂解物（RRL）和麥胚提取物（WGE），前者適合哺乳動物蛋白的高效表達，后者對植物和病毒蛋白更優(yōu)，且能處理長鏈RNA，但成本較高。此外，昆蟲細胞提取物系統(tǒng)近年也用于復雜蛋白的修飾研究。英國nuclera 高通量微流控蛋白表達篩選系統(tǒng)可助力支持無細胞蛋白表達技術，如想了解更多信息，歡迎咨詢官方代理商上海曼博生物！

無細胞蛋白表達技術的市場潛力主要來自三大驅動力：藥物研發(fā)效率提升、合成生物學產業(yè)化和診斷技術革新。制藥公司采用無細胞蛋白表達技術加速抗體和CAR-T細胞zhi liao藥物的開發(fā)，將傳統(tǒng)數月的過程縮短至數周。在合成生物學中，無細胞蛋白表達技術被用于規(guī)?；a人工酶和生物材料（如蜘蛛絲蛋白），推動可持續(xù)制造。此外，基于無細胞蛋白表達技術的便攜式診斷系統(tǒng)（如病原體檢測、ai癥早篩）因其低成本和快速響應能力，在POCT（即時檢驗）市場嶄露頭角。隨著自動化微流控設備的普及，無細胞蛋白表達技術正從實驗室走向GMP生產，滿足工業(yè)級蛋白制造的需求。添加 2 mM 鎂離子可使 ??大腸桿菌體外蛋白表達??產量提高 60%。

在無細胞合成生物學的框架下，可編程分子制造引擎的he xin角色可讓體外蛋白表達充當。其模塊化特性允許研究者將生物系統(tǒng)解構為三個可du li操作的層級：信息層：DNA/mRNA模板作為信息載體，其啟動子強度（如T7系統(tǒng)表達量比SP6高3倍）與5'UTR二級結構（ΔG<-50 kJ/mol時翻譯效率銳減）可自由優(yōu)化；執(zhí)行層：裂解物中的核糖體作為分子機器，通過補充非天然氨基酸（如對疊氮苯丙氨酸）擴展產物化學空間；調控層：添加核糖核酸開關（Riboswitch）或適配體（Aptamer）實現(xiàn)反饋控制，例如當產物積累至閾值濃度時觸發(fā)終止子發(fā)卡結構折疊終止反應。這種分層控制使體外蛋白表達能夠驅動人工設計基因回路的構建，例如合成振蕩器系統(tǒng)中T7 RNA聚合酶的自抑制表達實現(xiàn)周期為120分鐘的蛋白質濃度波動，為構建人工細胞提供可控的時空動態(tài)基礎。體外蛋白表達憑借其速度與靈活性的雙重優(yōu)勢，在基礎研究、藥物開發(fā)和即時診斷領域持續(xù)釋放價值。定制蛋白表達流程

大腸桿菌體外蛋白表達??的成本只為兔網織紅細胞系統(tǒng)的1/20，適合大規(guī)模篩選。差異蛋白表達陰性

無細胞蛋白表達技術因其操作簡單、周期短，已成為生物教學的理想工具。學生可在實驗課中直接觀察綠色熒光蛋白（GFP）的實時合成過程，直觀理解中心法則。在科研中，CFPS被用于研究翻譯調控機制、核糖體功能等基礎問題，例如通過添加特定抑制劑分析蛋白質合成的能量依賴性。從藥物開發(fā)到合成生命，無細胞蛋白表達技術的應用覆蓋了生物醫(yī)學、工業(yè)生物技術和基礎研究。其hexin價值在于打破細胞壁壘，實現(xiàn)“按需合成”，未來隨著自動化與微流控技術的結合，應用場景將進一步擴展。差異蛋白表達陰性