方法選擇是影響宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測結(jié)果的因素之一。酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）與液相色譜 - 質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（LC-MS），是當(dāng)前 HCP 檢測領(lǐng)域的兩類常用方法。據(jù)文獻統(tǒng)計，當(dāng)前在總 HCP 定量檢測中，ELISA 仍為主流技術(shù)；而 MS 法可用于特定蛋白（如高風(fēng)險蛋白）的鑒定與定量，已成為重要的互補手段。此外，檢測過程中所用試劑與耗材的質(zhì)量，會直接影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。質(zhì)量不達標(biāo)的試劑，可能引發(fā)檢測結(jié)果出現(xiàn)假陽性或假陰性。舉例來說，若抗體的特異性與親和力不足，可能在 ELISA 檢測中產(chǎn)生交叉反應(yīng)；若抗原代表性不足或抗體覆蓋率偏低，則可能造成漏檢；而稀釋液抗干擾能力較弱時，也會對檢測準(zhǔn)確性產(chǎn)生影響。相關(guān)案例研究顯示，采用定制化方法替代原有商業(yè)化試劑盒后，抗原代表性與抗體覆蓋率明顯提升，HCP 檢測值也呈現(xiàn)整體升高的趨勢。

宿主細胞蛋白（HCP）殘留監(jiān)測是生物藥物生產(chǎn)中的關(guān)鍵質(zhì)量屬性（Critical Quality Attribute, CQA），需在藥物開發(fā)與生產(chǎn)階段對 HCP 的存在實施嚴格監(jiān)控、管理及記錄。隨著生產(chǎn)流程推進，生物制品目標(biāo)蛋白純度逐步提升，HCP 含量則相應(yīng)持續(xù)下降，這導(dǎo)致對單抗、融合蛋白等富含目標(biāo)蛋白的下游工藝樣品進行 HCP 分析監(jiān)測時，難度明顯增加。在此背景下，高效的 HCP 富集材料與技術(shù)顯得尤為重要。SHENTEK^®AbunProteoX 是基于磁珠構(gòu)建的親和配體，能高效識別并結(jié)合目標(biāo)蛋白；借助磁性納米顆粒的獨特特性，它可快速高效捕獲 HCP，大幅提升檢測靈敏度。此外，該親和配體的普遍適用性，讓 AbunProteoX 處理多種生物樣本時表現(xiàn)優(yōu)異，可確保樣品中存在高濃度目標(biāo)蛋白時，對低濃度 HCP 的質(zhì)譜、電泳等檢測分析具備準(zhǔn)確性與可靠性。

宿主細胞蛋白殘留檢測中，抗體覆蓋率評估實驗的操作難度較高，需在實驗方法建立階段對關(guān)鍵步驟開展充分驗證，以確保實驗方法具備穩(wěn)健性。湖州申科研發(fā)的磁珠捕獲式 IMBS 技術(shù)（immunomagnetic beads separation，免疫磁珠分離），在開發(fā)過程中已對關(guān)鍵步驟進行充分驗證，相關(guān)驗證結(jié)果已通過專業(yè)評審，具體驗證內(nèi)容（部分）如下：① 方法優(yōu)化：圍繞磁珠與抗體的偶聯(lián)比例、洗滌液體積、洗滌次數(shù)、洗脫次數(shù)等關(guān)鍵參數(shù)開展優(yōu)化驗證，確保方法穩(wěn)健性；② 過程質(zhì)控：二維電泳存在實驗步驟繁瑣、時間跨度大、中間環(huán)節(jié)難把控等問題，因此在等電聚焦實驗環(huán)節(jié)引入熒光標(biāo)記多肽，可快速判定等電聚焦效果；同時在 SDS-PAGE 電泳兩側(cè)增設(shè) 40 ng 銀染質(zhì)控樣品，用于控制銀染顯色過程；③ 方法重復(fù)性：針對 2D 分析與 LC-MS 分析開展重復(fù)性驗證，其中 2D 分析方法的重復(fù)性可達 80% 以上，LC-MS 分析方法的重復(fù)性可達 90% 以上；④ 上樣量優(yōu)化：針對 2D 分析與 LC-MS 分析實施上樣量驗證，規(guī)避上樣量差異對檢測結(jié)果的影響；⑤ 假陽性排查：排查樣品與陰性抗體間是否存在非特異性結(jié)合，確認 IMBS 實驗設(shè)定的步驟與參數(shù)是否會導(dǎo)致假陽性結(jié)果。

昆蟲細胞桿狀病毒表達系統(tǒng)（IC-BEVS）是一種真核表達系統(tǒng)，以桿狀病毒為外源基因載體，以昆蟲細胞為宿主實現(xiàn)外源蛋白的生產(chǎn)。該系統(tǒng)具備便于規(guī)模化生產(chǎn)、培養(yǎng)成本低、生物安全性高等優(yōu)勢，近年已逐步應(yīng)用于重組蛋白、rAAV 載體、亞單位疫苗（如病毒樣顆粒（VLP）疫苗）等產(chǎn)品的生產(chǎn)，在生物制品重組蛋白表達領(lǐng)域已得到廣泛應(yīng)用。Sf9 細胞系源自草地夜蛾細胞系（Spodoptera frugiperda cell line，簡稱 Sf），是當(dāng)前較為常用的昆蟲細胞系之一。SHENTEK^® Sf9 HCP 殘留蛋白檢測試劑盒（一步酶聯(lián)免疫吸附法），可對采用 Sf9 細胞系生產(chǎn)的生物制品中宿主細胞蛋白（HCP）殘留進行定量檢測。該試劑盒的抗體覆蓋率分別為 70.4%-96.0%（采用 IMBS-2D 法）和 91.2%（采用 IMBS-MS 法，Unique Peptide ≥2）。

大腸埃希氏菌（Escherichiacoli，簡稱E.coli，又稱大腸桿菌）作為模式微生物，在生命科學(xué)研究領(lǐng)域應(yīng)用較多。伴隨基因治療產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展，它還成為質(zhì)粒DNA（pDNA）生產(chǎn)的主要宿主菌。質(zhì)粒樣品常規(guī)提取工藝中，常使用強堿性溶液進行細胞裂解與蛋白質(zhì)變性，這種處理使其中的宿主細胞蛋白（HCPs）與傳統(tǒng)物理破碎法得到的HCPs差異明顯，進而導(dǎo)致采用免疫學(xué)原理的檢測方法時，殘留檢測結(jié)果偏差較大。湖州申科生物的E.coli克隆菌堿裂HCP殘留檢測試劑盒，適用于大腸埃希氏菌（即大腸桿菌）克隆菌株的HCPs檢測，涵蓋DH5α、Top10、JM109等常見菌株。該試劑盒的抗體制備過程中，采用堿裂工藝制備的HCPs免疫動物，得到專屬抗體，可用于經(jīng)堿液裂解工藝處理后的宿主細胞蛋白（HCPs）定量檢測。

MDCK（Madin-DarbyCanineKidney，馬丁達比犬腎上皮細胞）細胞系是源于犬腎的持續(xù)性細胞系，廣泛應(yīng)用于流感病毒增殖純化、流感疫苗生產(chǎn)等過程，作為細胞基質(zhì)使用。憑借高病毒產(chǎn)量與滴度、無適應(yīng)性突變、易馴化等優(yōu)勢，MDCK細胞已成為業(yè)界公認的流感病毒毒株分離及流感疫苗生產(chǎn)適配細胞系。和其他產(chǎn)品雜質(zhì)類似，MDCK宿主殘留蛋白（HCP）可能對生物制品的安全性與有效性產(chǎn)生不良影響，因此在生產(chǎn)監(jiān)測、產(chǎn)品放行等環(huán)節(jié)，需對其開展定量研究并實施嚴格控制。SHENTEK^®MDCK HCP殘留檢測試劑盒（一步酶聯(lián)免疫吸附法），是湖州申科生物自主研發(fā)、擁有完全自主知識產(chǎn)權(quán)且關(guān)鍵試劑實現(xiàn)全國產(chǎn)化的MDCK HCP通用檢測試劑盒。該試劑盒適用于基于MDCK細胞基質(zhì)的病毒增殖純化、疫苗生產(chǎn)等過程，可對其中的MDCK宿主殘留蛋白進行定量檢測，且操作步驟簡便快捷、檢測專一性高、性能穩(wěn)定可靠。