RNA提?。侯A備工作RNA酶(Rnase)是導致RNA降解較主要的物質(zhì)。此酶非常穩(wěn)定,在一些極端的條件下只可暫時失活,但限制因素去除后又迅速恢復活性。常規(guī)高溫高壓滅菌方法和蛋白壓制劑不能使所有的Rnase完全失活。1.它普遍存在于人的皮膚上,因此制備RNA時必須戴手套。2.RNase的又一污染源是取液器。根據(jù)取液器制造商的要求對取液器進行處理。一般情況下采用以DEPC配制的70%乙醇擦洗取液器的內(nèi)部和外部,可基本達到要求。3.塑料制品、玻璃和金屬物品的處理。RNA提取試劑注意事項:耐高溫器物可150℃烘烤4小時以去除RNA酶。南京正規(guī)RNA提取試劑直銷價
植物RNA快速提取試劑盒:1.固體組織破碎設備??捎孟铝醒b置之一:1)玻璃勻漿器。泡酸清潔,用高壓滅菌蒸餾水洗滌數(shù)次。2)研缽。適用于液氮凍存組織的研磨,清洗方法同玻璃勻漿器。3)高速機械勻漿器(Polytron,Tekmar或類似產(chǎn)品),打開開關,在蒸餾水中清洗分散器頭數(shù)次。2.高壓蒸汽30分鐘消毒一次性吸頭離心管。RNA沉淀溶解之后,應嚴格使用高壓消毒的一次性用品。然而PlantRNAtrip能在RNA酶污染環(huán)境下工作,在裂解步驟可使用未高壓但潔凈的一次性吸頭和離心管,但光推薦在緊急情況下這樣做。3.普通雙蒸水,高壓消毒20分鐘。用于沖洗器皿,配制瓊脂糖凝膠和電泳用緩沖液。DEPC處理的雙蒸水。加DEPC到水中至終濃度為0.01%v/v,室溫過夜,高壓消毒30分鐘。用于溶解RNA,配制TE緩沖液和75%乙醇。4.濕冰。在冰上進行操作有助于減少RNA降解。5.其它用品。電泳槽,雙蒸水沖洗。離心機和加樣器,無需處理。6.戴手套。注意某些實驗如提取質(zhì)粒DNA如使用極大量RNA酶,為防污染,須較全仔細清洗實驗器具和實驗區(qū)域。珠海正規(guī)RNA提取試劑直銷廠家血漿/血清RNA提取試劑盒:對RNA尤其是smallRNA(<200nt)具有結合能力。
RNA提取試劑的選擇:對于富含多糖多酚的植物類組織提取是個難點,Takara精心研發(fā)的柱型提取試劑TaKaRaMiniBESTPlantRNAExtractionKit可以輕松解決這個問題。TaKaRaMiniBESTPlantRNAExtractionKit可以高效地從各種簡單的植物組織材料(葉片、莖、幼苗等)、富含多糖多酚的植物組織材料(果實、種子等)、菌類提取高純度的TotalRNA,適用范圍普遍。按照標準流程,本試劑盒可以有效地提取分子量大于200nt的RNA,也可以按照可選步驟提取得到包含SmallRNA(<200nt)的TotalRNA。試劑盒中包含了RNA提取所需的全部試劑,無需額外購買其它試劑。
昆蟲RNA柱式提取試劑盒使用方法:RNA完整性的電泳檢測:如果需要做Northern雜交,強烈建議用戶使用甲醛變性膠進行RNA電泳,因為非變性膠不能分離所有的RNA分子。注意:大部分昆蟲的28SRNA被切割成兩個小的片段,彼此用氫鍵相連,所以在甲醛變性膠中,沒有28S帶出現(xiàn)。RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測定:將5~10μLRNA溶于TE緩沖液中(pH7.5~8.2之間)檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度(1OD260的RNA=40μg/mL),進而計算出RNA的產(chǎn)量(濃度X體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/組織用量)。RNA純度測定:無污染的總RNA的OD260/OD280一般在1.8~2.1之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關),高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染,但一般不影響RT-PCR等反應。RNA提取試劑注意事項:為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
總RNA提取試劑是廣譜型總RNA提取試劑。實驗操作快速方便,顏色鮮明,便于分層。本試劑適用范圍普遍,可以從動物組織、植物材料、各種微生物及培養(yǎng)細胞等樣品中提取總RNA。該方法對少量的組織(50-100mg)和細胞(5×106)以及大量的組織(≥1g)和細胞(>107)均有較好的分離效果。樣品在總RNA提取試劑中被充分裂解的同時能夠較大限度地保證RNA的完整性。在加入氯仿離心后,溶液會分成三層:上層無色水相、中間層和下層紅色有機相,RNA分布在上清層中。收集上清層后,經(jīng)異丙醇沉淀便可以回收得到總RNA。提取的總RNA完整性好,無蛋白和DNA污染,可用于各種分子生物學常規(guī)實驗,如RT-PCR、Real-timeRT-PCR、Northernblot、DotBlot、體外翻譯等。植物花總RNA提取試劑盒:特殊的提取緩沖液保證特殊植物材料中的總RNA充分溶解。合肥深圳RNA提取試劑
植物RNA提取試劑:采用高效、專一結合核酸的離心吸附柱和獨特的緩沖系統(tǒng)。南京正規(guī)RNA提取試劑直銷價
動物細胞RNA提取:1、懸浮細胞:可直接離心后棄掉培養(yǎng)基,用無菌PBS清洗1~2遍后,再用適量PBS懸浮起來,然后再加入裂解液進行裂解。千萬不要完全棄掉液體后,往沉淀細胞里直接加入裂解液,這樣會使外表層的細胞裂解后釋放的組蛋白包裹粘附在沉淀細胞外側,從而限制沉淀內(nèi)部的細胞與裂解液的接觸,從而導致細胞裂解不徹底,降低RNA得率。2、半貼壁或貼壁不緊的細胞:棄掉培養(yǎng)基后,用PBS洗1~2次,然后直接吸取適量PBS用吸管或者泵吹打培養(yǎng)皿,把細胞吹下來,轉移到無RNA酶的EP管中,加裂解液進行提取。3、貼壁細胞:需要先用胰酶消化,然后收集到無RNA酶的EP管中,離心去其上清,用PBS洗1~2次,去除多余的胰酶,以適量PBS重懸后繼續(xù)進行提取步驟。南京正規(guī)RNA提取試劑直銷價