ELISA的結(jié)果可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮驮噭┖性O(shè)計(jì)進(jìn)行不同方式的判讀:·定量分析(Quantitative):這是最常見(jiàn)的應(yīng)用。通過(guò)精確的標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算出樣品中目標(biāo)物的***濃度(如ng/mL,pg/mL,IU/mL)。要求標(biāo)準(zhǔn)品濃度準(zhǔn)確,曲線擬合良好(R2>0.99),樣品OD值落在曲線范圍內(nèi)(比較好在中間線性好的部分)。適用于需要精確數(shù)值的研究和診斷?!ぐ攵糠治觯⊿emi-quantitative):當(dāng)無(wú)法獲得或不需要***濃度值時(shí)使用。通常將樣品的OD值與標(biāo)準(zhǔn)品(或一個(gè)已知的強(qiáng)陽(yáng)性對(duì)照)的OD值進(jìn)行比較,報(bào)告為“相當(dāng)于XXU/mL”或“高/中/低”?;蛘咴O(shè)定一個(gè)Cut-off值(臨界值),高于此值判為陽(yáng)性,低于判為陰性。常用于大批量篩查或監(jiān)測(cè)相對(duì)變化(如***前后抗體滴度變化)?!ざㄐ苑治觯≦ualitative):主要用于判斷樣品中目標(biāo)物是否存在(陽(yáng)性或陰性)。同樣需要設(shè)定一個(gè)Cut-off值。Cut-off值通?;陉幮詫?duì)照的平均OD值加上2倍或3倍標(biāo)準(zhǔn)差(陰性均值+2SD/3SD),或基于ROC曲線分析確定。定性檢測(cè)在傳染病篩查(如HIV、HCV抗體)、妊娠檢測(cè)等中應(yīng)用***。無(wú)論哪種判讀方式,設(shè)置合理的對(duì)照(空白、陰性、陽(yáng)性、質(zhì)控)和嚴(yán)格遵守操作規(guī)程是結(jié)果可靠性的基石。過(guò)期試劑盒可能導(dǎo)致假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果。中國(guó)臺(tái)灣兔ELISA試劑盒銷(xiāo)售價(jià)格
過(guò)敏性疾?。ㄈ邕^(guò)敏性鼻炎、***、特應(yīng)性皮炎、食物過(guò)敏)日益普遍。ELISA在過(guò)敏原檢測(cè)中扮演著雙重角色:1.檢測(cè)血清中過(guò)敏原特異性IgE(sIgE):o這是體外診斷I型(速發(fā)型)過(guò)敏反應(yīng)的金標(biāo)準(zhǔn)方法之一(另一種是免疫印跡/芯片)。o原理:將純化的或重組的單一過(guò)敏原(如塵螨Derp1、花生蛋白Arah2、貓毛蛋白Feld1)包被在微孔板上(或使用多孔板同時(shí)檢測(cè)多種過(guò)敏原)。加入患者血清,如果血清中含有針對(duì)該過(guò)敏原的sIgE抗體,則與之結(jié)合。洗滌后,加入酶標(biāo)記的抗人IgE抗體(二抗),形成“固相過(guò)敏原-sIgE-酶標(biāo)抗IgE”復(fù)合物。顯色后信號(hào)強(qiáng)度與sIgE含量成正比。o優(yōu)勢(shì):可定量或半定量報(bào)告sIgE濃度(kU<sub>A</sub>/L),幫助確定致敏程度;檢測(cè)不受藥物(如抗組胺藥)影響;安全性高(無(wú)需激發(fā)試驗(yàn))。o應(yīng)用:輔助診斷特定過(guò)敏原誘發(fā)的過(guò)敏性疾病,識(shí)別交叉反應(yīng)性,監(jiān)測(cè)******效果。o局限性:sIgE陽(yáng)性*表示致敏(Sensitization),不一定等同于臨床過(guò)敏(Allergy),需結(jié)合病史解讀;無(wú)法檢測(cè)非IgE介導(dǎo)的過(guò)敏反應(yīng);檢測(cè)種類(lèi)受限于包被的過(guò)敏原。青海羊ELISA試劑盒咨詢報(bào)價(jià)細(xì)胞培養(yǎng)上清液需離心去除碎片后再檢測(cè)。
·應(yīng)用:o糖尿病診斷與分型(胰島素、C肽)。o甲狀腺功能評(píng)估(TSH,FreeT3,FreeT4-后者常用化學(xué)發(fā)光)。o生殖內(nèi)分泌(LH,FSH,E2,P,PRL,睪酮)。o腎上腺功能評(píng)估(皮質(zhì)醇、ACTH)。o骨質(zhì)疏松相關(guān)(PTH,25-OHVitD)。o生長(zhǎng)發(fā)育評(píng)估(GH,IGF-1)?!?yōu)勢(shì):靈敏度能滿足多數(shù)***檢測(cè)需求;特異性好(尤其使用單克隆抗體);高通量;成本適中?!ぬ魬?zhàn):o***存在結(jié)合蛋白(如皮質(zhì)醇結(jié)合球蛋白CBG,性***結(jié)合球蛋白SHBG),影響游離(有活性)***的檢測(cè)。一些ELISA檢測(cè)總***,一些則需專(zhuān)門(mén)方法測(cè)游離***。o***分泌有節(jié)律性(如皮質(zhì)醇的晝夜節(jié)律),采樣時(shí)間需標(biāo)準(zhǔn)化。o類(lèi)固醇***結(jié)構(gòu)相似,抗體交叉反應(yīng)可能導(dǎo)致干擾。高靈敏度和特異性要求抗體質(zhì)量極高。o臨床主流正逐漸轉(zhuǎn)向自動(dòng)化程度更高、靈敏度更優(yōu)的化學(xué)發(fā)光免疫分析(CLIA)。
絕大多數(shù)ELISA試劑盒(尤其是夾心法)依賴于一對(duì)特異性識(shí)別目標(biāo)抗原不同表位的單克隆抗體(mAb),或者一個(gè)單抗與一個(gè)多抗的組合。其中一個(gè)抗體作為捕獲抗體(Capture Antibody),預(yù)包被在微孔板孔底,負(fù)責(zé)從樣品中“抓住”目標(biāo)抗原。另一個(gè)抗體作為檢測(cè)抗體(Detection Antibody),通常連接有報(bào)告酶(如HRP或ALP),負(fù)責(zé)特異性識(shí)別并結(jié)合已被捕獲的抗原,形成“捕獲抗體-抗原-酶標(biāo)檢測(cè)抗體”的復(fù)合物。這對(duì)抗體的質(zhì)量(親和力、特異性)及其配對(duì)的兼容性(不競(jìng)爭(zhēng)同一表位、結(jié)合效率高)是決定試劑盒靈敏度、特異性和檢測(cè)范圍的關(guān)鍵因素。***的試劑盒會(huì)經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的抗體篩選和配對(duì)優(yōu)化,以確保比較好性能。有些試劑盒可能采用生物素-鏈霉親和素系統(tǒng)進(jìn)行信號(hào)放大,此時(shí)檢測(cè)抗體標(biāo)記的是生物素。洗滌不徹底會(huì)明顯影響實(shí)驗(yàn)的特異性。
ELISA試劑盒可檢測(cè)多種樣本類(lèi)型,包括血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿、尿液、唾液等。不同樣本需采用特定的預(yù)處理方法以確保檢測(cè)準(zhǔn)確性。例如,血清樣本應(yīng)避免溶血,離心后取上清;組織樣本需裂解并離心去除碎片;細(xì)胞培養(yǎng)上清可能含有高濃度蛋白,需適當(dāng)稀釋。某些樣本(如尿液)可能含有干擾物質(zhì),需通過(guò)透析或添加抑制劑處理。此外,反復(fù)凍融可能破壞目標(biāo)蛋白,建議分裝保存于-80°C。樣本處理的標(biāo)準(zhǔn)化是保證ELISA結(jié)果可重復(fù)性的關(guān)鍵。樣本預(yù)處理可減少基質(zhì)效應(yīng)對(duì)檢測(cè)的干擾。安徽國(guó)產(chǎn)ELISA試劑盒一般多少錢(qián)
ELISA試劑盒的保存條件通常為2-8℃避光。中國(guó)臺(tái)灣兔ELISA試劑盒銷(xiāo)售價(jià)格
***是內(nèi)分泌腺或細(xì)胞分泌的、通過(guò)血液循環(huán)作用于靶***的化學(xué)信使。準(zhǔn)確測(cè)定***水平對(duì)于內(nèi)分泌疾病的診斷、***監(jiān)測(cè)和生理研究至關(guān)重要。ELISA是臨床和科研中檢測(cè)多種***的主流技術(shù)?!z測(cè)對(duì)象:血清、血漿、尿液(如24h尿皮質(zhì)醇)中的肽類(lèi)/蛋白類(lèi)***和部分小分子類(lèi)固醇***(需競(jìng)爭(zhēng)法)。o肽類(lèi)/蛋白類(lèi)***:胰島素、C肽、胰***素、生長(zhǎng)***(GH)、促腎上腺皮質(zhì)***(ACTH)、促甲狀腺***(TSH)、黃體生成素(LH)、卵泡刺***(FSH)、泌乳素(PRL)、甲狀旁腺***(PTH)、降鈣素等。通常使用夾心法。o類(lèi)固醇***:皮質(zhì)醇、睪酮、雌二醇(E2)、孕酮(P)、脫氫表雄酮(DHEA-S)、25-羥基維生素D等。由于是小分子,主要采用競(jìng)爭(zhēng)法ELISA。也可檢測(cè)尿液中的***代謝物(如雌三醇)。中國(guó)臺(tái)灣兔ELISA試劑盒銷(xiāo)售價(jià)格