LFB染色（Luxol fast blue染色）是神經(jīng)病理學(xué)中特異性顯示髓鞘結(jié)構(gòu)的經(jīng)典染色技術(shù)，其原理基于LFB染料的陽(yáng)離子特性與髓鞘中酸性脂蛋白的靜電結(jié)合。標(biāo)準(zhǔn)染色流程需嚴(yán)格控制條件：石蠟切片脫蠟至水后，浸入0.1%LFB染液（60℃預(yù)熱）中孵育8-16小時(shí)（過(guò)夜染色效果比較好），隨后用95%乙醇洗去多余染料；關(guān)鍵分化步驟采用0.05%鋰碳酸溶液處理30-90秒，在顯微鏡監(jiān)控下至白質(zhì)呈現(xiàn)亮藍(lán)色而灰質(zhì)近乎無(wú)色，***用焦油紫或中性紅復(fù)染神經(jīng)元胞體。.甲苯胺藍(lán)染色能突出顯示肥大細(xì)胞顆粒，在過(guò)敏性疾病或肥大細(xì)胞增生癥的診斷中具有特異***理切片

特殊染色技術(shù)的聯(lián)合應(yīng)用是提高病理診斷精細(xì)度的重要策略，通過(guò)多染色結(jié)果的相互印證，可***解析復(fù)雜的組織病理學(xué)改變。在肝臟疾病評(píng)估中，典型組合包括：① Masson三色染色（藍(lán)色膠原纖維）與網(wǎng)狀纖維染色（黑色銀染）聯(lián)用，能區(qū)分肝硬化（Masson顯示寬大纖維間隔）與肝纖維化（網(wǎng)狀纖維顯示纖細(xì)網(wǎng)格）；② PAS染色（紫紅色糖原）聯(lián)合淀粉酶消化對(duì)照，可鑒別肝糖原貯積癥（淀粉酶敏感）與α-1抗胰蛋白酶缺乏癥（淀粉酶抵抗的嗜酸性小球）。對(duì)于血液系統(tǒng)疾病，普魯氏藍(lán)染色（藍(lán)色鐵沉積）需與Perls-DAB增強(qiáng)法聯(lián)用，在骨髓活檢中既能顯示環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞（診斷MDS），又能通過(guò)DAB顯色量化鐵負(fù)荷程度。病理切片銀染技術(shù)如Gomori染色能凸顯網(wǎng)狀纖維分布，在肝*與增生結(jié)節(jié)鑒別診斷中發(fā)揮關(guān)鍵作用。

特殊組織處理技巧：對(duì)易脫片的腦組織，可在染色前用1%多聚賴(lài)氨酸處理載玻片***斑塊建議先進(jìn)行蘇木精復(fù)染（30秒），再油紅O染色以顯示泡沫細(xì)胞定位染色失敗補(bǔ)救：對(duì)已脫水的切片可用70℃熱PBS處理2分鐘恢復(fù)脂質(zhì)顯色***研究顯示，聯(lián)合尼羅紅熒光染色（Ex/Em=488/525nm）可提高微小脂滴（<1μm）的檢出率，尤其適用于非酒精性脂肪肝的早期診斷。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立標(biāo)準(zhǔn)操作手冊(cè)，明確規(guī)定從取材到封片的全流程時(shí)間控制（總時(shí)長(zhǎng)不超過(guò)45分鐘），確保染色結(jié)果的可重復(fù)性。

油紅O染色作為中性脂肪檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)，其技術(shù)難點(diǎn)在于脂肪組織極易在染色過(guò)程中溶解丟失。為比較大限度保持脂質(zhì)完整性，需采取以下系統(tǒng)性防護(hù)措施：樣本前處理階段固定后必須流水沖洗12小時(shí)以上，徹底***殘留甲醛（甲醛會(huì)破壞脂蛋白結(jié)構(gòu)）冰凍切片厚度控制在8-10μm，過(guò)?。?lt;5μm）會(huì)導(dǎo)致脂滴破裂預(yù)冷載玻片（4℃）上貼片，減少組織回溫造成的脂質(zhì)擴(kuò)散染色過(guò)程控制采用改良染液配方：0.3%油紅O（60%異丙醇+40%蒸餾水配制），過(guò)濾后4℃避光保存（有效期7天）染色缸預(yù)冷至10℃，染色時(shí)間精確控制在8分鐘（室溫染色時(shí)縮短至5分鐘）分化使用60%異丙醇（而非傳統(tǒng)85%濃度），分化時(shí)間不超過(guò)10秒封片與質(zhì)控免脫水直接封片：染色后PBS稍沖洗，立即用含5%聚乙烯醇的甘油明膠封固設(shè)置雙對(duì)照：陽(yáng)性對(duì)照（正常脂肪組織）監(jiān)測(cè)染色效率，陰性對(duì)照（異丙醇脫脂處理）驗(yàn)證特異性數(shù)字化分析：采用ImageJ軟件定量染色面積（閾值設(shè)定RGB R>180）麗春紅染色可顯示肌肉組織的細(xì)微病變，在肌營(yíng)養(yǎng)不良或肌炎的診斷中具有輔助價(jià)值。

該染色在臨床診斷中具有不可替代的價(jià)值：①在遺傳性血色?。℉H）中，能清晰顯示肝細(xì)胞、胰腺腺泡細(xì)胞及心肌細(xì)胞內(nèi)彌漫分布的藍(lán)色顆粒，鐵定量分析可評(píng)估疾病分期；②在含鐵血黃素沉著癥時(shí)，可鑒別肺泡巨噬細(xì)胞吞噬的含鐵血黃素（藍(lán)色陽(yáng)性）與其他色素沉積；③在骨髓檢查中有助于診斷鐵粒幼細(xì)胞性貧血（環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞>15%為診斷標(biāo)準(zhǔn)）。操作中需嚴(yán)格控制技術(shù)要點(diǎn)：鹽酸濃度過(guò)高（>4%）會(huì)導(dǎo)致組織水解，而濃度過(guò)低（<1%）則降低反應(yīng)敏感性；亞鐵**鉀溶液需新鮮配制（保質(zhì)期<1周），若呈現(xiàn)綠色則提示氧化失效；骨髓等富含鐵的組織應(yīng)縮短染色時(shí)間至10分鐘以避免過(guò)度染色?，F(xiàn)代數(shù)字化病理系統(tǒng)可通過(guò)分析藍(lán)色染色面積實(shí)現(xiàn)鐵沉積的半定量評(píng)估，為療效監(jiān)測(cè)提供客觀依據(jù)。陰性對(duì)照需經(jīng)鐵螯合劑（如去鐵胺）預(yù)處理以驗(yàn)證染色特異性。微流控芯片整合多重染色流程，實(shí)現(xiàn)微量樣本的高通量、自動(dòng)化病理檢測(cè)與分析。病理切片

硫黃素T染色在淀粉樣變性的熒光診斷中具有高敏感性，其黃色熒光可作為早期篩查指標(biāo)。病理切片

蘇木精染色的時(shí)間會(huì)直接影響細(xì)胞核的顯色效果。如果染色時(shí)間不足，細(xì)胞核可能會(huì)呈現(xiàn)灰藍(lán)色，導(dǎo)致核結(jié)構(gòu)模糊；如果染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，細(xì)胞核會(huì)過(guò)度吸收染料，呈現(xiàn)深紫色，甚至?xí)谏w核內(nèi)細(xì)節(jié)。在實(shí)際操作中，需根據(jù)組織類(lèi)型和切片厚度調(diào)整染色時(shí)間，通常為5-15分鐘。染色后需用1%鹽酸乙醇分化，去除多余染料，再通過(guò)溫水或自來(lái)水沖洗返藍(lán)，使細(xì)胞核呈現(xiàn)清晰的藍(lán)紫色。分化時(shí)間需在顯微鏡下控制，以細(xì)胞核染色清楚而細(xì)胞質(zhì)基本無(wú)色為佳。病理切片