一種是用beta巰基乙醇打開蛋白質(zhì)分子二硫鍵的，另一種是用DTT(二硫蘇糖醇)。兩者的作用是一樣的，但特點不一樣，前者更容易與氧氣反應(yīng)，穩(wěn)定性比后者差，如果在常溫下暴露在空中，前者只能維持24小時的活性，后者卻可以維持7天左右。所以該如何選擇?如果是蛋白樣品較少，跑幾次就可以用完的樣品，這時選擇beta巰基乙醇。如果樣品很多，計劃跑上幾十次的，優(yōu)先選擇DTT,建議變性后分裝保存。二、SDS-PAGE凝膠配制1、配膠前準(zhǔn)備首先強調(diào)一下，一塊好的膠是跑好蛋白的前提，所以這個環(huán)節(jié)也不容忽視。玻璃板的選擇，一種是1毫米厚度的，另一種是，這個厚度選擇也是有講究的，如果上樣體積小于10微升，優(yōu)先選1毫米，否則選。原因是什么?答案在轉(zhuǎn)膜部分揭曉。還有分離膠的濃度也要選擇適合的。然后玻璃板和梳子要洗干凈，晾干。裝板，注意厚板和薄板的底部要對齊，否則會漏膠。加制膠的各成分前，要觀察液體是否有沉淀，有沉淀的盡量不要用。2、制膠按配方說明依次加入各組分，加完SDS后先簡單手動搖勻幾下，然后迅速加入過硫酸銨和TEMED,搖勻，緊接著就灌膠。然后我習(xí)慣用95%的酒精壓膠，我也用過純水，感覺純水壓沒那么好，由于水的密度較大，會把分界處的膠壓得膨大。避免了在人身上進行實驗所帶來的風(fēng)險。北京高脂高糖動物模型培養(yǎng)

技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供利用gm20541基因構(gòu)建視網(wǎng)膜色素變性疾病模型的方法和應(yīng)用，采用該構(gòu)建方法可以得到視網(wǎng)膜色素變性疾病模型，該模型可表現(xiàn)出視網(wǎng)膜色素變性性疾病特征，該模型可用于視網(wǎng)膜色素變性性疾病的研究，可以幫助闡明rp的發(fā)病過程及機制，并為該疾病的或預(yù)防提供新的靶標(biāo)。本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的：方面，本發(fā)明實施例提供了一種利用gm20541基因構(gòu)建視網(wǎng)膜色素變性疾病模型的方法，其包括：敲除目標(biāo)動物視網(wǎng)膜前體細(xì)胞中的基因組中的gm20541基因。znf124是一種編碼鋅指蛋白的新基因。鋅指蛋白是一類具有手指狀結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)錄因子，對基因調(diào)控起重要的作用。znf124蛋白可穿過核孔進入核內(nèi)，作為轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控其他基因的表達。目前針對znf124蛋白功能的研究報道并不多，對其功能也知之甚少，znf124與一種先天性系統(tǒng)發(fā)育疾病dandy-walker復(fù)合征(dandy-walkercomplex，dwc)相關(guān)。此外，znf124被認(rèn)為參與了前體生長因子(vegf)對人造血細(xì)胞凋亡的抑制作用，表明znf124在人體生命活動中承擔(dān)有重要功能。發(fā)明人的另一研究表明，znf124基因突變與rp有關(guān)，對探索rp的致病機制有極大幫助。因此，深入研究znf124對視網(wǎng)膜色素變性疾病的及病因探討潛力巨大。西藏C57動物模型實驗室脂多糖（LPS）聯(lián)合煙熏法致慢性阻塞性肺部疾病小鼠模型。

我們知道WB實驗步驟繁瑣，一次實驗歷時也不短，從提蛋白到顯影結(jié)束可能要三天，我們就講一下這里面的一些關(guān)鍵環(huán)節(jié)。一、蛋白提取及變性1、提取蛋白很多經(jīng)驗豐富的WB實驗者都深有體會，蛋白提取是影響結(jié)果重要的環(huán)節(jié)之一。該過程重要的是防降解和保證蛋白濃度不要太低。防降解主要有兩點，一是裂解前注意保持樣品處于低溫環(huán)境中，二是裂解時加入足夠的蛋白酶抑制劑。我們習(xí)慣先用冰冷的PBS做心臟的體循環(huán)灌注，然后冰上取腦，分離各腦區(qū)(嗅球，皮層，海馬，中腦，小腦，延髓，丘腦，紋狀體)后置于，用液氮速凍后轉(zhuǎn)移至-80度冰箱長期保存。接著是保證蛋白濃度，即要加入適量的裂解液，加太少會使蛋白提取不充分，加太多會讓蛋白濃度太低，一般經(jīng)驗是這樣的，細(xì)胞樣品例如一個六孔板的細(xì)胞加60微升的裂解液，動物組織的話每毫克組織加10微升裂解液。還要加上超聲破碎處理，具體方案見討論部分。如果沒有超聲破碎儀，那就用1毫升注射器不斷抽吸，冰上反復(fù)抽吸1分鐘左右，注意不要產(chǎn)生過多氣泡。(需要灌注取材的視頻可以私聊獲取，由于文件過大，又比較血腥，不宜直接放到文章里。)2、蛋白變性加入上樣緩沖液后100攝氏度煮10分鐘，這里的上樣緩沖液有兩種可選。

結(jié)果發(fā)現(xiàn)在這些組織中，gm20541均有表達，說明該基因可能在體內(nèi)發(fā)揮重要功能。2采用免疫印跡(westernblot)的方法檢測gm20541基因在不同組織中的表達。方法：(1)分別獲取小鼠腦、肝臟、視網(wǎng)膜、心臟、腎臟以及脾，充分研磨后加入200μl蛋白裂解液ripa。(2)超聲破碎細(xì)胞后，在冰上裂解20min。(3)4℃，16000g離心10min后，取上清轉(zhuǎn)移至另一干凈離心管，加入50μl的蛋白上樣液，混勻后95℃加熱5min。(4)待樣本冷卻后，分別取20μl，160v電壓進行聚丙烯酰胺凝膠電泳(sds-page)以分離蛋白。(5)sds-page結(jié)束后，根據(jù)需要，裁剪適當(dāng)大小的硝酸纖維素膜，按順序鋪上濾紙、膠、硝酸纖維素膜及濾紙，并趕去氣泡，轉(zhuǎn)膜槽放入冰水浴中，采用恒流，轉(zhuǎn)膜2h。(6)轉(zhuǎn)膜完畢后，純水沖洗硝酸纖維素膜一遍，晾干并標(biāo)記。然后用8％的脫脂牛奶封閉2h。(7)封閉完成后，加入一定量的按一定比例(按照抗體使用說明書)稀釋于封閉液的一抗，4℃孵育過夜。(8)回收一抗，1×tbst緩沖液洗膜4次，每次10min，根據(jù)一抗來源，選擇合適二抗，用1×tbst稀釋辣根過氧化氫酶(hrp)標(biāo)記的二抗，室溫于搖床上孵育2h。(9)二抗孵育結(jié)束后，用1×tbst洗膜3次，每次10min，用thermo的elc發(fā)光試劑盒檢測蛋白。長期攝入酒精致慢性酒精性肝病，建立酒精肝大鼠模型。

本發(fā)明實施例提供了由上述的方法所得到的視網(wǎng)膜色素變性疾病模型在視網(wǎng)膜色素變性性疾病研究中的應(yīng)用。進一步地，在本發(fā)明的一些實施方案中，所述研究是以非疾病的為目的。通過本發(fā)明的構(gòu)建方法得到的動物模型其具有典型視網(wǎng)膜色素變性性疾病特征，其具有非常廣闊的應(yīng)用前景，例如將其用于研究視網(wǎng)膜色素變性性疾病的發(fā)病過程、發(fā)病機制，為深入了解研究視網(wǎng)膜色素變性性疾病提供基礎(chǔ)。又或者將其用于篩選用于預(yù)防或視網(wǎng)膜色素變性性疾病藥物、用于評價藥物的療效或預(yù)后等。第三方面，本發(fā)明實施例提供了由上述的方法所得到的視網(wǎng)膜色素變性疾病模型在篩選用于預(yù)防或視網(wǎng)膜色素變性性疾病藥物中的應(yīng)用。在本發(fā)明方面提供了構(gòu)建方法的基礎(chǔ)上，本領(lǐng)域技術(shù)人員容易想到將由該方法得到的視網(wǎng)膜色素變性疾病模型用于篩選預(yù)防或視網(wǎng)膜色素變性性疾病藥物或其他類似領(lǐng)域，這也是屬于本發(fā)明的保護范圍。進一步地，在本發(fā)明的一些實施方案中，所述應(yīng)用包括：向所述視網(wǎng)膜色素變性疾病模型施用候選藥物，如果所述視網(wǎng)膜色素變性疾病模型在施用所述候選藥物前后發(fā)生如下變化中的至少一種，則指示所述候選藥物可以作為預(yù)防或視網(wǎng)膜色素變性性疾病的藥物：(1)施用所述候選藥物后。人類疾病的動物模型是指各種醫(yī)學(xué)科學(xué)研究中建立的具有人類疾病模擬表現(xiàn)的動物。湖南乳鼠動物模型實驗室

（arteriosclerosis，AS）是一種緩慢進行性疾病，嚴(yán)重影響人類健康。北京高脂高糖動物模型培養(yǎng)

本實用新型屬于動物實驗設(shè)備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種高原性人類疾病模型制備環(huán)境模擬系統(tǒng)。背景技術(shù)：高原環(huán)境模擬系統(tǒng)可以在非高原地區(qū)“制造”出不同海拔高度和氣候條件，模擬各種高原缺氧環(huán)境，使實驗動物在一定時間內(nèi)根據(jù)實驗需求達到預(yù)期的高原反應(yīng)癥狀，使實驗動物表現(xiàn)出高原性疾病，為高原疾病研究人員提供高原疾病模型動物，便于研究或預(yù)防高原性疾病的藥物?，F(xiàn)有的環(huán)境模擬系統(tǒng)可以模擬實現(xiàn)高原光照和低氧環(huán)境，但模型成功率較低、動物死亡率較高、造模動物種類單一。技術(shù)實現(xiàn)要素：本實用新型的目的在于：提供一種高原性人類疾病模型制備環(huán)境模擬系統(tǒng)，解決現(xiàn)有高原環(huán)境模擬系統(tǒng)中存在的模型成功率較低、動物死亡率較高、造模動物種類單一的問題。本實用新型采用的技術(shù)方案如下：一種高原性人類疾病模型制備環(huán)境模擬系統(tǒng)，包括功能設(shè)備集成底座和設(shè)置在功能設(shè)備集成底座上的飼養(yǎng)倉，所述飼養(yǎng)倉具有無極調(diào)控微負(fù)壓裝置、高原低氧環(huán)境模擬裝置、高原光照環(huán)境模擬裝置、高原溫度環(huán)境模擬裝置、高原濕度環(huán)境模擬裝置、動物行為學(xué)遠程觀察單元，所述飼養(yǎng)倉內(nèi)設(shè)置有若干代謝籠，飼養(yǎng)倉前后箱體上設(shè)置有觀察窗和若干操作窗。北京高脂高糖動物模型培養(yǎng)