特發(fā)性肺纖維化(IPF)小鼠模型建立【方法】1、BALB/c小鼠麻醉,6-8周齡,體重20~25g,仰臥固定于實驗臺上,頸部去毛后酒精消毒,切開皮膚,逐層暴露氣管;2、將1mL注射器經(jīng)兩氣管軟骨環(huán)間隙朝向心端刺入氣管,回抽無阻力;3、注入博萊霉素(約4~5mg/kg)再向氣管內(nèi)注入~3次,使藥物在肺部分布均勻;4、以大鼠身體長軸為中心,正反快速旋轉(zhuǎn)鼠板1~2分鐘。縫合皮膚,局部聚維酮碘消毒(或用青霉素消毒)防止,室溫保持在24~25℃,待動物自然清醒后置籠內(nèi)常規(guī)飼養(yǎng)。肺纖維化模型發(fā)展時間:2周可見肺系數(shù)(肺重/體重×100%)、羥脯氨酸含量明顯升高。顯微鏡下可見炎癥細(xì)胞浸潤,以淋巴細(xì)胞、單核吞噬細(xì)胞為主,并有肺泡壁增厚、成纖維細(xì)胞增生等Ⅱ級肺泡炎表現(xiàn)。4周可見肺間質(zhì)內(nèi)有大量散在綠染的膠原纖維,肺泡結(jié)構(gòu)破壞,見有許多纖維細(xì)胞等Ⅲ級肺間質(zhì)纖維化病變。大鼠模型病理組織學(xué)與病理生理學(xué)改變與人類肺間質(zhì)纖維化相似。其病變早期表現(xiàn)為滲出性肺泡炎,炎癥細(xì)胞在病變處聚集增多。晚期為肺間質(zhì)纖維化,間質(zhì)細(xì)胞增生,基質(zhì)膠原聚集取代正常的肺組織結(jié)構(gòu)?!緳z測】組織病理切片HE染色。通過高脂飲食誘導(dǎo)構(gòu)建非酒精性脂肪肝模型。西藏小鼠動物模型培養(yǎng)
IgA腎病小鼠模型【目的】建立IgA腎病小鼠模型,并觀察模型的生化及病理指標(biāo)特點?!静牧稀?、酸化水:鹽酸調(diào)滅菌水;2、蓖麻油+CCl4:5:1配制;3、LPS:;4、血清白蛋白BSA:800mg/kg用量,滅菌水配制;【方法】小鼠BSA+CCl4+脂多糖LPS誘導(dǎo)法1、20g小鼠牛血清白蛋白BSA(800mg/kg)隔天灌胃1次,配制160mg/ml,灌胃100ul/只,持續(xù)8周;2、同時皮下注射蓖麻油和CCl4(5:1),1次/周,持續(xù)8周;3、分別于第6、8周以()尾靜脈注射LPS,1次/周;4、每兩周取24h尿液一次觀察尿蛋白及紅細(xì)胞;5、每日觀察精神、飲食、大小便,第9周處死,取血和腎、肝做相應(yīng)檢查;6、取尿液后2000r/min離心10min,取上清用全自動生化儀檢測尿蛋白肌酐比值,鏡下觀察尿沉渣中有無紅細(xì)胞。江蘇裸鼠動物模型實驗大鼠面癱模型的建立。
所述高原光照環(huán)境模擬裝置15包括可見暖光系統(tǒng)和照明亮度無極控制系統(tǒng),所述可見暖光系統(tǒng)設(shè)置飼養(yǎng)倉2頂部。本實施例的工作原理:本系統(tǒng)集成了可見暖光系統(tǒng)(可模擬高原紅外線和紫外線)與照明亮度無極控制系統(tǒng),需要燈光時,可通過燈光系統(tǒng)開啟紫外燈以及照明燈,并可根據(jù)所需實現(xiàn)亮度調(diào)節(jié),通過日光燈加紫外線燈來實現(xiàn)高原高紫外線光照環(huán)境。實施例5在實施例1的基礎(chǔ)上提供的一種高原性人類疾病模型制備環(huán)境模擬系統(tǒng),所述高原溫度環(huán)境模擬裝置16包括降溫系統(tǒng)、升溫系統(tǒng)、溫控系統(tǒng)和溫度采集顯示系統(tǒng)。本實施例的工作原理:本系統(tǒng)配置降溫系統(tǒng)、升溫系統(tǒng)、溫控系統(tǒng)與溫度采集顯示系統(tǒng)使系統(tǒng)內(nèi)溫度可無極調(diào)控,以保障海拔(3000m~7000m)高原溫度環(huán)境進行模擬,溫度調(diào)節(jié)通過冷暖風(fēng)機來實現(xiàn),就是和空調(diào)一樣的原理。實施例6在實施例1的基礎(chǔ)上提供的一種高原性人類疾病模型制備環(huán)境模擬系統(tǒng),所述高原濕度環(huán)境模擬裝置17包括加濕系統(tǒng)、除濕系統(tǒng)、濕度控制系統(tǒng)和濕度采集顯示系統(tǒng)。本實施例的工作原理:本系統(tǒng)配置加濕系統(tǒng)、除濕系統(tǒng)、濕度控制系統(tǒng)與濕度采集顯示系統(tǒng)使系統(tǒng)內(nèi)濕度可無極調(diào)控,以保障海拔(3000m~7000m)高原濕度環(huán)境進行模擬。
基因/蛋白質(zhì)表達(dá)定性或定量檢測在進行分子檢測的過程中,保持核酸和蛋白質(zhì)的完整性至關(guān)重要,因此在取樣過程中,應(yīng)盡量避免核酸及蛋白質(zhì)的降解。如不注意采樣過程,將會導(dǎo)致樣本中的核酸及蛋白質(zhì)的無差別降解,嚴(yán)重影響后續(xù)分子檢測結(jié)果。在條件允許的情況下,組織樣本在離體后應(yīng)立刻裝入凍存管內(nèi),并立即放入液氮中進行冷凍。在RNA提取樣本的保存過程中,可以選擇非冷凍型RNA保存液或Trizol試劑進行RNA酶的抑制。針對蛋白質(zhì)提取樣本的保存,我們同樣可以使用商品化的蛋白酶抑制劑進行短期處理。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PolymeraseChainReaction,PCR)及免疫印跡(Westernblotting,WB),這兩種實驗手段是分子生物學(xué)檢測中不可或缺的一部分,也是發(fā)表論文至關(guān)重要的分子檢測數(shù)據(jù)。PCR主要用來對基因在基因組層面或轉(zhuǎn)錄層面的變化進行定性或定量檢測,而WB則主要用來對某一蛋白質(zhì)的表達(dá)進行定量檢測。(4)轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)及代謝組學(xué)檢測隨著檢測水平及相關(guān)產(chǎn)業(yè)的不斷發(fā)展,各類組學(xué)檢測的價格降低,實驗設(shè)計中也常常運用組學(xué)檢測來提升實驗設(shè)計的檔次。在我們進行轉(zhuǎn)錄組學(xué)及蛋白質(zhì)組學(xué)的檢測過程中,同樣是要首先確保目標(biāo)RNA或蛋白質(zhì)的片段完整性。博萊霉素是具有多種抗腫瘤作用的多組分,其毒副作用之一是引起肺纖維化。
疾病神經(jīng)系統(tǒng)疾病模型動物抗抑郁對腦突觸體攝取5-HT、NA、DA的抑制作用(樣品篩選、IC50測定)大鼠強迫游泳試驗(大/小鼠,Noduls軟件、視屏分析)大/小鼠小鼠懸尾試驗(Noduls軟件、視屏分析)小鼠5-羥色胺增強試驗小鼠利血平誘導(dǎo)眼瞼下垂試驗小鼠育亨賓毒性增強試驗小鼠高劑量阿撲拮抗小鼠大鼠慢性輕度不可預(yù)見性刺激(CUMS)模型大鼠新環(huán)境進食抑制實驗大/小鼠小鼠腦內(nèi)單胺氧化酶MAO-A、MAO-B活性測定小鼠對新生大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞的保護作用(谷氨酸損傷、過氧化氫損傷、缺糖缺氧損傷、損傷等)新生大鼠對SH-SY5Y細(xì)胞合成分泌BDNF的作用SH-SY5Y細(xì)胞抗驚厥育亨賓毒性增強試驗小鼠戊四唑驚厥小鼠荷包牡丹堿驚厥小鼠印防己驚厥小鼠抗焦慮與戊巴比妥類藥物的協(xié)同作用小鼠對巴比妥閾下劑量的影響小鼠再入睡試驗小鼠曠場實驗(大/小鼠,全程攝像監(jiān)控、軟件處理)大/小鼠大鼠高架十字迷宮法(全程攝像監(jiān)控、軟件處理)大鼠大鼠穿梭箱法(全程攝像監(jiān)控、軟件處理)大鼠抗帕金森氏癥抗帕金森氏癥6-羥多巴胺致大鼠帕金森病模型大鼠MPTP模型(雙側(cè)損毀PD模型)大/小鼠氧化震顫素致顫模型大/小鼠疼痛。動物疾病模型廣泛應(yīng)用于疾病機制研究、新藥靶點發(fā)現(xiàn)及篩選、藥效評價、轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)等醫(yī)學(xué)前沿領(lǐng)域。西藏模式動物模型建模
合理建立周圍性面癱動物模型對進一步深入研究具有重要意義。西藏小鼠動物模型培養(yǎng)
擴增產(chǎn)物為。其中a2,3,6,9,10,b1為陽性。擴增3’端長臂使用引物:neof:5’-cgccttcttgacgagttcttctga-3’;gm3’lrr:5’-ggtgcttgagtagtgttgaatctcagtggacca-3’結(jié)果見圖3中b,擴增產(chǎn)物為。其中:a2,3,6,9,10,b6,9,es1g,es2g為陽性雜合子,+/+為野生型對照。5將步驟4得到的雜合子小鼠動物與轉(zhuǎn)基因鼠flper鼠交配繁育,得到gm20541基因條件性敲除雜合子小鼠;6將步驟5得到的gm20541基因條件性敲除雜合子小鼠相互交配繁育,得到gm20541基因條件性敲除純合子小鼠;7將步驟6得到的gm20541基因條件性敲除純合子動物與轉(zhuǎn)six3-cre基因動物交配,得到視網(wǎng)膜前體細(xì)胞gm20541基因敲除小鼠。轉(zhuǎn)基因鼠flper鼠購自美國捷克森實驗室(品系名稱:(rosa)26sortm1(flp1)dym/rainj)。six3-cre轉(zhuǎn)基因小鼠(mgi:3574771)由美國德克薩斯大學(xué)安德森中心贈送。six3是一個前腦腹側(cè)和視網(wǎng)膜前體細(xì)胞的標(biāo)志性轉(zhuǎn)錄因子,其特異性驅(qū)動cre基因在視網(wǎng)膜前體細(xì)胞表達(dá),cre蛋白可以進入細(xì)胞核,識別基因組上loxp位點,實現(xiàn)基因敲除?;蚯贸∈箬b定步驟:對上述視網(wǎng)膜前體細(xì)胞敲除gm20541基因的小鼠的基因型鑒定,操作如下:(1)剪小鼠尾梢少許組織樣本,置于干凈的;(2)在離心管中加入100μl裂解液。西藏小鼠動物模型培養(yǎng)