堿燒傷致角膜損傷大鼠模型一、服務(wù)信息1、動(dòng)物模型名稱：堿燒傷致角膜損傷大鼠模型2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種屬：SD大鼠3、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物性別：雌雄不限4、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物年齡：成年5、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重：160-200g6、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境：SPF級(jí)二、服務(wù)項(xiàng)目服務(wù)編號(hào)服務(wù)內(nèi)容服務(wù)周期價(jià)錢DH2020堿燒傷致角膜損傷大鼠模型1周詢價(jià)1、實(shí)驗(yàn)方法：氫氧化鈉致大鼠角膜化學(xué)性損傷。大鼠用戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，用干棉棒拭去結(jié)膜囊多余液體，將統(tǒng)一規(guī)格直徑3mm的圓形濾紙片浸入1mol/LNaOH溶液中20s，飽和后取出置于干燥濾紙上1秒以吸去過(guò)多的堿液，將濾紙片貼敷于大鼠右眼角膜90s后移去，立即用滅菌水沖洗結(jié)膜囊及角膜2min。2、檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)：肉眼或裂隙燈下觀察到角膜有損傷。三、交付標(biāo)準(zhǔn):1.提供動(dòng)物模型構(gòu)建過(guò)程中的原始實(shí)驗(yàn)記錄及數(shù)據(jù)圖片。2.根據(jù)要求提供構(gòu)建成功的模型動(dòng)物或相關(guān)組織材料。四、服務(wù)項(xiàng)目說(shuō)明：1、如有特殊要求，請(qǐng)另詢價(jià)。2、雙方簽訂合同后，收取70%首付后啟動(dòng)實(shí)驗(yàn)。小鼠膽管結(jié)扎誘導(dǎo)炎癥性肝損傷和肝纖維化模型的建立。北京哪里有動(dòng)物模型技術(shù)

基因/蛋白質(zhì)表達(dá)定性或定量檢測(cè)在進(jìn)行分子檢測(cè)的過(guò)程中，保持核酸和蛋白質(zhì)的完整性至關(guān)重要，因此在取樣過(guò)程中，應(yīng)盡量避免核酸及蛋白質(zhì)的降解。如不注意采樣過(guò)程，將會(huì)導(dǎo)致樣本中的核酸及蛋白質(zhì)的無(wú)差別降解，嚴(yán)重影響后續(xù)分子檢測(cè)結(jié)果。在條件允許的情況下，組織樣本在離體后應(yīng)立刻裝入凍存管內(nèi)，并立即放入液氮中進(jìn)行冷凍。在RNA提取樣本的保存過(guò)程中，可以選擇非冷凍型RNA保存液或Trizol試劑進(jìn)行RNA酶的抑制。針對(duì)蛋白質(zhì)提取樣本的保存，我們同樣可以使用商品化的蛋白酶抑制劑進(jìn)行短期處理。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PolymeraseChainReaction，PCR）及免疫印跡（Westernblotting，WB），這兩種實(shí)驗(yàn)手段是分子生物學(xué)檢測(cè)中不可或缺的一部分，也是發(fā)表論文至關(guān)重要的分子檢測(cè)數(shù)據(jù)。PCR主要用來(lái)對(duì)基因在基因組層面或轉(zhuǎn)錄層面的變化進(jìn)行定性或定量檢測(cè)，而WB則主要用來(lái)對(duì)某一蛋白質(zhì)的表達(dá)進(jìn)行定量檢測(cè)。（4）轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)及代謝組學(xué)檢測(cè)隨著檢測(cè)水平及相關(guān)產(chǎn)業(yè)的不斷發(fā)展，各類組學(xué)檢測(cè)的價(jià)格降低，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中也常常運(yùn)用組學(xué)檢測(cè)來(lái)提升實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的檔次。在我們進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組學(xué)及蛋白質(zhì)組學(xué)的檢測(cè)過(guò)程中，同樣是要首先確保目標(biāo)RNA或蛋白質(zhì)的片段完整性。模式動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)室博萊霉素是具有多種抗腫瘤作用的多組分，其毒副作用之一是引起肺纖維化。

e：不同光強(qiáng)下gm20541基因敲除小鼠的暗適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖b波統(tǒng)計(jì)；scotopicamplitude：暗光測(cè)定峰值；flashintensity：閃光強(qiáng)度；a-wave：a波；b-wave：b波。圖6：光適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖(erg)檢測(cè)結(jié)果；圖中：a-b：不同光強(qiáng)下gm20541基因敲除小鼠的光適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖軌跡圖；c：20cd·s/m2光強(qiáng)下gm20541基因敲除小鼠的光適應(yīng)閃爍(flicker)視網(wǎng)膜電圖軌跡圖；d：不同光強(qiáng)下gm20541基因敲除小鼠的光適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖a波統(tǒng)計(jì)；e：不同光強(qiáng)下gm20541基因敲除小鼠的光適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖b波統(tǒng)計(jì)；f：20cd·s/m2光強(qiáng)下gm20541基因敲除小鼠的光適應(yīng)閃爍(flicker)視網(wǎng)膜電圖統(tǒng)計(jì)。sixko或cko表示gm20541基因敲除純合子小鼠；ctr是指野生型；het是指雜合子。圖7：視網(wǎng)膜前體細(xì)胞特異敲除gm20541基因小鼠視網(wǎng)膜切片免疫組化染色結(jié)果；小鼠年齡：4個(gè)月；os：outer-segment(外節(jié))；is：inner-segment(內(nèi)節(jié))；onl：outernuclearlayer(外核層)；inl：innernuclearlayer(內(nèi)核層)；圖中：a：視網(wǎng)膜前體細(xì)胞特異敲除gm20541基因小鼠視網(wǎng)膜石蠟切片的h&e染色結(jié)果，外核層及內(nèi)核層均變?。籦：對(duì)不同部位的gm20541敲除鼠視網(wǎng)膜外核層厚度統(tǒng)計(jì)。圖8：視網(wǎng)膜前體細(xì)胞特異敲除gm20541基因小鼠ihc染色結(jié)果。

一種是用beta巰基乙醇打開(kāi)蛋白質(zhì)分子二硫鍵的，另一種是用DTT(二硫蘇糖醇)。兩者的作用是一樣的，但特點(diǎn)不一樣，前者更容易與氧氣反應(yīng)，穩(wěn)定性比后者差，如果在常溫下暴露在空中，前者只能維持24小時(shí)的活性，后者卻可以維持7天左右。所以該如何選擇?如果是蛋白樣品較少，跑幾次就可以用完的樣品，這時(shí)選擇beta巰基乙醇。如果樣品很多，計(jì)劃跑上幾十次的，優(yōu)先選擇DTT,建議變性后分裝保存。二、SDS-PAGE凝膠配制1、配膠前準(zhǔn)備首先強(qiáng)調(diào)一下，一塊好的膠是跑好蛋白的前提，所以這個(gè)環(huán)節(jié)也不容忽視。玻璃板的選擇，一種是1毫米厚度的，另一種是，這個(gè)厚度選擇也是有講究的，如果上樣體積小于10微升，優(yōu)先選1毫米，否則選。原因是什么?答案在轉(zhuǎn)膜部分揭曉。還有分離膠的濃度也要選擇適合的。然后玻璃板和梳子要洗干凈，晾干。裝板，注意厚板和薄板的底部要對(duì)齊，否則會(huì)漏膠。加制膠的各成分前，要觀察液體是否有沉淀，有沉淀的盡量不要用。2、制膠按配方說(shuō)明依次加入各組分，加完SDS后先簡(jiǎn)單手動(dòng)搖勻幾下，然后迅速加入過(guò)硫酸銨和TEMED,搖勻，緊接著就灌膠。然后我習(xí)慣用95%的酒精壓膠，我也用過(guò)純水，感覺(jué)純水壓沒(méi)那么好，由于水的密度較大，會(huì)把分界處的膠壓得膨**鼠面癱模型的建立。

酒精性肝病(AH)大鼠模型建模方法【方法】1、正常組大鼠自由飲水。2、酒精性脂肪肝(alcoholicfattyliverdisease，AFL)模型組大鼠自由飲用酒精飲料，其酒精濃度從5%開(kāi)始，每個(gè)濃度維持一周，依次改為10%、15%、20%、25%、30%、35%至40%，以40%濃度持續(xù)至12周。3、在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，各組大鼠均給以普通顆粒飼料，共持續(xù)為12周。4、第12，動(dòng)物禁食12h，稱重，下腔靜脈取血處死，血液離心取上清備用?！緳z測(cè)】1、生化指標(biāo)檢測(cè)檢測(cè)ALT、AST、TC、TG、FFA、LDL-C、HDL-C和血糖的含量。2、組織病理學(xué)酒精性脂肪肝模型組大鼠肝臟體積增大，明顯腫脹，包膜緊張，邊緣圓鈍，呈奶黃色，切面油膩，腹腔內(nèi)尤以有腹膜后脂肪堆積明顯。HE染色顯示，正常組肝臟內(nèi)無(wú)明顯脂肪變性，肝小葉結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞索圍繞靜脈呈放射排列。模型組肝臟彌漫大量脂肪變性，細(xì)胞體積增大，呈氣球樣變。3、標(biāo)志因子水平ELISA法測(cè)定血清中TNF-α和ApoB的含量。特發(fā)性肺纖維化（IPF）小鼠模型建立。江蘇C57動(dòng)物模型

它主要影響身體內(nèi)的大中動(dòng)脈，如冠狀動(dòng)脈、頸動(dòng)脈、腦動(dòng)脈和腎動(dòng)脈等，其發(fā)病機(jī)制的主要過(guò)程。北京哪里有動(dòng)物模型技術(shù)

經(jīng)多級(jí)乙醇至水洗：二甲苯(i)5min→二甲苯(ⅱ)5min→100％乙醇2min→95％的乙醇1min→80％乙醇1min→75％乙醇1min→蒸餾水洗2min；4)蘇木素染色5分鐘，自來(lái)水沖洗；5)鹽酸乙醇分化30秒；6)自來(lái)水浸泡15分鐘；7)置伊紅液2分鐘。8)常規(guī)脫水，透明，封片：95％乙醇(i)1min→95％乙醇(ⅱ)1min→100％乙醇(i)1min→100％乙醇(ⅱ)1min→二甲苯石碳酸(3：1)1min→二甲苯(i)1min→二甲苯(ⅱ)1min→中性樹(shù)脂封固。9)顯微鏡下拍照。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在4個(gè)月時(shí)，與ctrl(對(duì)照)小鼠比較，sixko小鼠的視網(wǎng)膜外核層已經(jīng)開(kāi)始變薄，表明感光細(xì)胞死亡(圖7)。實(shí)施例5視網(wǎng)膜冰凍切片免疫染色：取4月齡的由實(shí)施例2得到的gm20541基因敲除純合子小鼠斷頸處死后，快速取眼球，并放入4％的pfa中，冰上固定15min后，在角膜上剪口，然后繼續(xù)冰上固定。2h后，pbs緩沖液沖洗3遍，然后將眼球置于30％蔗糖溶液中脫水2h，然后解剖鏡下剪去角膜及晶體，oct包埋并迅速置于-80℃冰箱冷凍。大約10min后，取出oct包埋的眼球，置于冰凍切片機(jī)-25℃平衡約30min后即可切片。切片厚度為12μm。切片完成后，選取質(zhì)量較高的片子于37℃烘箱放置30min，然后免疫組化筆在有視網(wǎng)膜組織的地方畫圈，pbs洗三遍以去除oct。北京哪里有動(dòng)物模型技術(shù)