科手術(shù)設(shè)備|細(xì)胞/組織支持系統(tǒng)|膜片鉗|輔助設(shè)備|其它常用耗材燒杯|漏斗|量筒|廣口罐|研缽和研杵|手套|移液管|移液器(Pipette)單道手動(dòng)移液器|單道電動(dòng)移液器|多道手動(dòng)移液器多道電動(dòng)移液器|正置換移液器|瓶口分液器吸頭(Tips)濾芯吸頭(滅菌)|濾芯吸頭(未滅菌)|普通吸頭(滅菌)普通吸頭(未滅菌)|多道移液器吸頭液體工作站吸頭|其它瓶(Bottle)離心瓶|稱量瓶|存儲(chǔ)瓶|比重瓶|血清瓶|滴瓶吸氣瓶|細(xì)胞培養(yǎng)瓶|培養(yǎng)基瓶|其它瓶(Flask)藍(lán)蓋瓶|燒瓶|平底燒瓶|克氏(長頸)燒瓶|碘測(cè)定燒瓶|蒸餾燒瓶|容量瓶|過濾瓶|其它管(Tube&Vial)離心管|微離心管|樣品儲(chǔ)存管|凍存管|反應(yīng)管聚乙烯保存管|細(xì)胞培養(yǎng)管|自動(dòng)上樣管|其它PCR耗材PCR管|PCR條板|PCR板|實(shí)時(shí)定量PCR毛細(xì)管其它微孔板微孔板(96孔)|微孔板(384孔)|微孔板。腫瘤細(xì)胞具有極強(qiáng)的增殖能力，在一個(gè)適宜,裸鼠成瘤是常見的驗(yàn)證腫瘤細(xì)胞體內(nèi)增殖模型。云南豚鼠科研技術(shù)服務(wù)技術(shù)

METTL3能夠促進(jìn)肺腺細(xì)胞的生長、生存和侵襲，但還不清楚它是否作為m6A調(diào)節(jié)器或效應(yīng)器發(fā)揮作用[25]。在急性髓細(xì)胞白血?。ˋML）患者中，m(6)A調(diào)控基因的突變或拷貝數(shù)變化與TP53突變存在密切聯(lián)系，且m(6)A調(diào)控基因的改變與AML不良預(yù)相關(guān)[26]。此外，F(xiàn)TO在AML中高表達(dá)，它通過降低mRNA轉(zhuǎn)錄本中的m(6)水平，調(diào)節(jié)ASB2和RARA等靶點(diǎn)的表達(dá)，增強(qiáng)了白血病基因介導(dǎo)的細(xì)胞轉(zhuǎn)化和白血病形成，并抑制全反式維甲酸(ATRA)誘導(dǎo)的AML細(xì)胞分化[27]。在脂肪形成過程中，F(xiàn)TO表達(dá)與m6A水平成負(fù)相關(guān)，促進(jìn)脂肪形成[3]。在膠質(zhì)細(xì)胞瘤樣細(xì)胞中，ALKBH5通過lncRNAFOXM1介導(dǎo)FOXM1基因pre-mRNA上的m6A修飾維持膠質(zhì)瘤細(xì)胞的成瘤性[28]。此外，甲基轉(zhuǎn)移酶METTL3或METTL14的敲除，能夠改變m6A的富集和ADAM19的表達(dá)，極大地促進(jìn)了膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長、自我更新和形成[29]。圖2m6ARNA修飾和介導(dǎo)的功能[30]m6A的研究方向主要是通過研究m6A修飾相關(guān)的甲基化、去甲基化酶和識(shí)別蛋白的功能，進(jìn)而研究m6A修飾的生物學(xué)功能和作用機(jī)制：一般通過敲除m6A酶分子，研究下游功能基因分子的表達(dá)和m6A甲基化情況，通過介導(dǎo)相關(guān)基因異常（可變剪切、穩(wěn)定性、翻譯、miRNA調(diào)控）影響細(xì)胞表型和功能特征。寧夏病理科研技術(shù)服務(wù)培養(yǎng)EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)是一種快速、準(zhǔn)確、靈敏的細(xì)胞增殖檢測(cè)方法.

如胰腺，一般取胰島較多的胰腺尾部；肺應(yīng)取有細(xì)支氣管及帶有軟骨片的小支氣管部。如果實(shí)驗(yàn)需進(jìn)行多樣本的采集，采集順序應(yīng)按照：消化，神經(jīng)系統(tǒng)，皮膚，肌肉等的順序進(jìn)行。選好塊的切面。熟悉某些成分安排，然后決定其切面的走向；如一長管狀以橫切面較好。切除不需要的部分。特別是周圍的脂肪等，應(yīng)盡可能掉，否則給固定、脫水、浸蠟、切片等帶來一些不必要的問題。樣品的固定（1）固定的方法：①小塊固定法：從動(dòng)物取下的小塊，立即置入液態(tài)固定劑（這是應(yīng)用經(jīng)常的方法）。②注射/灌注固定法：某些塊由于體積過大或固定液極難滲入內(nèi)部或需要對(duì)整個(gè)臟器或整個(gè)動(dòng)物進(jìn)行固定，這時(shí)宜采用注射固定法，將固定液注入血管，經(jīng)血管分支到達(dá)整個(gè)和全身，從而得到充分的固定。另，空腔比如肺，肺內(nèi)含有空氣，固定液難以滲入，建議先做肺灌注，使得肺充盈滿固定液以后再進(jìn)行保存，如果空腔中氣體沒有排出，后續(xù)可能影響固定效果（沒有灌注的肺會(huì)浮在液體表面不利于固定，切片以后也會(huì)看到很多的空泡）。③蒸汽固定法：比較細(xì)小而薄的標(biāo)本，可用鋨酸或甲醛蒸汽固定。主要用于血液或細(xì)胞涂片以及某些薄膜的固定。。

m6A修飾圖譜構(gòu)建及作用機(jī)制：通過m6A甲基化測(cè)序（MeRIP-Seq,miCLIP）構(gòu)建疾病細(xì)胞模型或者發(fā)病組織的m6A修飾譜，分析m6A的motif,peaks數(shù)量及分布，Peak關(guān)聯(lián)基因的特征，聯(lián)合RNA-seq研究m6A甲基化與表達(dá)的關(guān)系。m6A研究思路方案一方案二研究案例1、.(IF=)為研究ALKBH5的m6A作用機(jī)制，作者利用芯片和m6A-seq篩選到膠質(zhì)瘤增殖相關(guān)的FOXM1，通過qPCR、WB、免疫熒光、核質(zhì)分離WB/qPCR、RIP和MeRIP等實(shí)驗(yàn)證明ALKBH5通過去甲基化調(diào)節(jié)FOXM1在GSCs中的表達(dá)。為研究ALKBH5對(duì)FOXM1的作用是否受其他因子的調(diào)節(jié)，作者研究了FOXM1的鄰近基因，發(fā)現(xiàn)lncRNAFOXM1-AS與FOXM1序列互補(bǔ)，且共表達(dá)、共定位，進(jìn)一步通過RIP,RNApulldown等實(shí)驗(yàn)證明lncRNAFOXM1-AS促進(jìn)ALKBH5和FOXM1初級(jí)轉(zhuǎn)錄本的相互作用。通過細(xì)胞實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證ALKBH5在lncRNAFOXM1-AS的作用下維持FOXM1的表達(dá)和細(xì)胞增殖，從而維持GSCs的干性。圖3ALKBH5敲除細(xì)胞中m6A修飾的特征和基因表達(dá)的變化2、RNAN6-methyladenosinemethyltransferaseMETTL3promoteslivercancerprogressionHepatology,2017.(IF=)表觀遺傳改變極大地促進(jìn)了人類癥的發(fā)生。傳統(tǒng)的表觀遺傳研究主要集中在DNA甲基化，組蛋白修飾和染色質(zhì)重構(gòu)。近。細(xì)胞劃痕(wound healing）法是簡(jiǎn)捷測(cè)定細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)和修復(fù)能力的方法。

是整體甲基化進(jìn)程所必須的[2]。FTO是ALKB家族的成員，作為個(gè)被發(fā)現(xiàn)的去甲基酶，可影響剪切因子SRSF2的RNA結(jié)合能力，進(jìn)而調(diào)控pre-mRNA的剪切加工過程[3]。目前已發(fā)現(xiàn)FTO調(diào)節(jié)異常與肥胖、大腦畸形和生長遲緩相關(guān)，揭示m6A可能對(duì)這些疾病具有重要的調(diào)節(jié)功能[4-6]。ALKBH5是ALKB家族中被發(fā)現(xiàn)具有去甲基作用的另一個(gè)成員，以RNaseA敏感的方式與核小斑共定位，它可直接催化m6A-甲基化腺苷去除甲基而不同于FTO的氧化去甲基化[7].此外，ALKBH5和它的去甲基化活性影響新生mRNA合的成和剪切效率[7]，且ALKBH5敲除雄性小鼠表現(xiàn)出精子發(fā)生異常，這可能是精子發(fā)生相關(guān)基因表達(dá)改變的結(jié)果[7]。m6AmRNA修飾執(zhí)行其功能主要通過兩個(gè)途徑：精細(xì)調(diào)控甲基化轉(zhuǎn)錄本的結(jié)構(gòu)，以阻止或誘使蛋白-RNA相互作用；或被直接由m6A結(jié)合蛋白識(shí)別，誘發(fā)續(xù)反應(yīng)。目前一類含有YTH功能結(jié)構(gòu)域的蛋白被鑒定為m6A修飾的結(jié)合蛋白。其中YTHDF1,YTHDF2,YTHDF3，YTHDC1和YTHDC2己被證實(shí)是ｍ６Ａ的結(jié)合蛋白.YTHDF1主要影響ｍ６Ａ修飾基因的翻譯，YTHDF2主要影響ｍ６Ａ修飾基因的降解，而YTHDC1結(jié)合ｍ６Ａ修飾的基因影響其剪接。HNRNPC是一種豐富的核RNA結(jié)合蛋白，參與pre-mRNA的加工[8]。EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)是一種新型的細(xì)胞增殖檢測(cè)方法。浙江小鼠科研技術(shù)服務(wù)外包

以客戶需求為導(dǎo)向，提供個(gè)性化的科研技術(shù)服務(wù)，助力科研項(xiàng)目的順利實(shí)施。云南豚鼠科研技術(shù)服務(wù)技術(shù)

代謝組學(xué)的研究對(duì)象大都是相對(duì)分子量在1000以內(nèi)的小分子物質(zhì)，因此常用的血液樣本在取樣后，應(yīng)小心操作，防止溶血，盡快分離出血清，分置于溫環(huán)境下保存。由于用于理實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物采集相對(duì)其他樣品的采集，操作更繁瑣，在處理過程中許多細(xì)節(jié)容易忽略，造成數(shù)據(jù)不完美（甚至不能用）。因此接下來將重點(diǎn)介紹樣品采集的注意事項(xiàng)及其固定。樣品采集注意事項(xiàng)應(yīng)新鮮，操作時(shí)間盡可能短，否則細(xì)胞發(fā)生死后變化、自融及現(xiàn)象。是動(dòng)物心臟還在跳動(dòng)時(shí)采集，樣本取出后在5分鐘以內(nèi)置于固定液內(nèi)，避免長時(shí)間暴露在空氣環(huán)境中。塊盡量小而薄。塊的厚度以不超過5mm為宜，較為理想的厚度為2mm左右，主要目的是使固定液迅速而均勻的滲入塊內(nèi)部。勿使塊受擠壓。在采集過程中，應(yīng)盡量選擇較為鋒利的手術(shù)，如手術(shù)刀片等，避免操作過程中擠壓挫傷標(biāo)本。擠壓過的均不可用。固定液的量一般以塊大小的20倍為宜，能夠在容器內(nèi)自由移動(dòng)。盡量保持的原有形態(tài)。新鮮經(jīng)固定后，或多或少產(chǎn)生收縮現(xiàn)象（如胃腸），為此可將展平，以盡可能維持原形。保持清潔。塊上如有血液、污物、粘液、食物、糞便等，可用生理鹽水沖洗，然后再入固定液，但要注意防止損傷。要熟悉采集部位。要能準(zhǔn)確的按解剖部位采集。云南豚鼠科研技術(shù)服務(wù)技術(shù)