基因/蛋白質表達定性或定量檢測在進行分子檢測的過程中，保持核酸和蛋白質的完整性至關重要，因此在取樣過程中，應盡量避免核酸及蛋白質的降解。如不注意采樣過程，將會導致樣本中的核酸及蛋白質的無差別降解，嚴重影響后續(xù)分子檢測結果。在條件允許的情況下，組織樣本在離體后應立刻裝入凍存管內，并立即放入液氮中進行冷凍。在RNA提取樣本的保存過程中，可以選擇非冷凍型RNA保存液或Trizol試劑進行RNA酶的抑制。針對蛋白質提取樣本的保存，我們同樣可以使用商品化的蛋白酶抑制劑進行短期處理。聚合酶鏈式反應（PolymeraseChainReaction，PCR）及免疫印跡（Westernblotting，WB），這兩種實驗手段是分子生物學檢測中不可或缺的一部分，也是發(fā)表論文至關重要的分子檢測數據。PCR主要用來對基因在基因組層面或轉錄層面的變化進行定性或定量檢測，而WB則主要用來對某一蛋白質的表達進行定量檢測。（4）轉錄組學、蛋白質組學及代謝組學檢測隨著檢測水平及相關產業(yè)的不斷發(fā)展，各類組學檢測的價格降低，實驗設計中也常常運用組學檢測來提升實驗設計的檔次。在我們進行轉錄組學及蛋白質組學的檢測過程中，同樣是要首先確保目標RNA或蛋白質的片段完整性。面神經受損而致面部表情肌群的運動功能障礙,對患者的心理和日常生活造成很大的影響。西藏基因敲除動物模型造模

然后5％的nds。含有％triton)封閉通透2h，孵育一抗，4℃過夜。第二天，pbs清洗三次后，孵育相應的熒光二抗，然后再用pbs清洗三次，封片，觀察。結果見圖8，在小鼠4月齡時，通過視網膜冰凍組織切片染色外節(jié)抗體rhodopsin以及內節(jié)抗體nak-atpase后發(fā)現，相較于野生型小鼠，gm20541基因敲除純合子小鼠(圖中sixko)視網膜外節(jié)明顯縮短，表現出了明顯退化表征。綜上，可以看出，本發(fā)明實施例以小鼠為例，通過cre-loxp基因敲除技術，在小鼠視網膜前體細胞中特異性敲除gm20541基因，小鼠表現出了視力受損，視細胞外節(jié)變短退化以及視細胞丟失等視網膜色素變性疾病典型表征。由此充分說明，在視網膜前體細胞敲除gm20541基因，可以使目標動物表現出視網膜色素變性疾病。視網膜前體細胞敲除gm20541基因的動物，可以作為視網膜色素變性疾病模型。該疾病模型可以用于視網膜色素變性疾病研究等領域中，為該疾病的研究例如發(fā)病過程、機制以及相關藥物的篩選提供一種新的模型。雖然本發(fā)明實施例展示了在小鼠的視網膜前體細胞敲除gm20541基因后的表型，但本領域技術人員容易理解到，小鼠作為哺乳動物的代表性動物，在其他的哺乳類動物中敲除gm20541基因或其同源基因也應當具有相似的表型。江蘇小鼠動物模型飼養(yǎng)（arteriosclerosis，AS）是一種緩慢進行性疾病，嚴重影響人類健康。

擴增產物為。其中a2,3,6,9,10,b1為陽性。擴增3’端長臂使用引物：neof:5’-cgccttcttgacgagttcttctga-3’；gm3’lrr:5’-ggtgcttgagtagtgttgaatctcagtggacca-3’結果見圖3中b，擴增產物為。其中：a2,3,6,9,10,b6,9,es1g,es2g為陽性雜合子，+/+為野生型對照。5將步驟4得到的雜合子小鼠動物與轉基因鼠flper鼠交配繁育，得到gm20541基因條件性敲除雜合子小鼠；6將步驟5得到的gm20541基因條件性敲除雜合子小鼠相互交配繁育，得到gm20541基因條件性敲除純合子小鼠；7將步驟6得到的gm20541基因條件性敲除純合子動物與轉six3-cre基因動物交配，得到視網膜前體細胞gm20541基因敲除小鼠。轉基因鼠flper鼠購自美國捷克森實驗室(品系名稱：(rosa)26sortm1(flp1)dym/rainj)。six3-cre轉基因小鼠(mgi：3574771)由美國德克薩斯大學安德森中心贈送。six3是一個前腦腹側和視網膜前體細胞的標志性轉錄因子，其特異性驅動cre基因在視網膜前體細胞表達，cre蛋白可以進入細胞核，識別基因組上loxp位點，實現基因敲除。基因敲除小鼠鑒定步驟：對上述視網膜前體細胞敲除gm20541基因的小鼠的基因型鑒定，操作如下：(1)剪小鼠尾梢少許組織樣本，置于干凈的；(2)在離心管中加入100μl裂解液。

經多級乙醇至水洗：二甲苯(i)5min→二甲苯(ⅱ)5min→100％乙醇2min→95％的乙醇1min→80％乙醇1min→75％乙醇1min→蒸餾水洗2min；4)蘇木素染色5分鐘，自來水沖洗；5)鹽酸乙醇分化30秒；6)自來水浸泡15分鐘；7)置伊紅液2分鐘。8)常規(guī)脫水，透明，封片：95％乙醇(i)1min→95％乙醇(ⅱ)1min→100％乙醇(i)1min→100％乙醇(ⅱ)1min→二甲苯石碳酸(3：1)1min→二甲苯(i)1min→二甲苯(ⅱ)1min→中性樹脂封固。9)顯微鏡下拍照。結果發(fā)現在4個月時，與ctrl(對照)小鼠比較，sixko小鼠的視網膜外核層已經開始變薄，表明感光細胞死亡(圖7)。實施例5視網膜冰凍切片免疫染色：取4月齡的由實施例2得到的gm20541基因敲除純合子小鼠斷頸處死后，快速取眼球，并放入4％的pfa中，冰上固定15min后，在角膜上剪口，然后繼續(xù)冰上固定。2h后，pbs緩沖液沖洗3遍，然后將眼球置于30％蔗糖溶液中脫水2h，然后解剖鏡下剪去角膜及晶體，oct包埋并迅速置于-80℃冰箱冷凍。大約10min后，取出oct包埋的眼球，置于冰凍切片機-25℃平衡約30min后即可切片。切片厚度為12μm。切片完成后，選取質量較高的片子于37℃烘箱放置30min，然后免疫組化筆在有視網膜組織的地方畫圈，pbs洗三遍以去除oct。放血致失血性貧血小鼠模型。

40mmnaoh，)，并在金屬浴100℃加熱1h；(3)取出離心管，冷卻至室溫后，加入100μl的中和液(40mmtris-hcl，)，10000g離心2min后，取上清用于小鼠基因型鑒定。(3)pcr擴增：按照如系配置pcr反應體系2×taqmix：10μl尾巴組織裂解液：2μl引物1(gm20541-loxp-forward或six3-cre-forward)：1μl(濃度：10mm)引物2(gm20541-loxp-reverse或six3-cre-reverse)：1μl(濃度：10mm)ddh2o：6μl。引物序列如下：gm20541-loxp-forward序列：5’-attccccttcaagatagctac-3’；gm20541-loxp-reverse序列：5’-aatgatcaactgtaattcccc-3’；six3-cre-forward序列：5’-gccgccgggatcactctcg-3’；six3-cre-reverse序列：5’-ccagccgccgtcgcaactc-3’。擴增程序：pcr反應體系配制完后，在pcr儀上于95℃預加熱5分鐘使模板dna充分變性，然后進入擴增循環(huán)。在每一個循環(huán)中，先于95℃保持30秒鐘使模板變性，然后將溫度降到復性溫度58℃，保持30秒，使引物與模板充分退火；在72℃保持30秒，使引物在模板上延伸，合成dna，完成一個循環(huán)。重復這樣的循環(huán)25次，使擴增的dn段大量累積。，在72℃保持5分鐘，使產物延伸完整，4℃保存。(4)凝膠電泳稱取1g瓊脂糖放于100mltaebuffer中。特發(fā)性肺纖維化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是臨床上具有代表性的一種慢性纖維化性肺。湖北實驗動物模型實驗

故大腦中動脈阻塞(MCAO)模型被用于局灶性腦缺血的研究。西藏基因敲除動物模型造模

表明在gm20541敲除鼠視網膜外節(jié)變短退化。sixko表示gm20541基因敲除純合子小鼠；ctr是指野生型小鼠；dapi(4,6-diamidino-2-phenylindole)：細胞核染料4,6-二脒基-2-苯基吲哚；rhodopsin：視紫紅質抗體；merge：兩種顏色重疊。具體實施方式為使本發(fā)明實施例的目的、技術方案和優(yōu)點更加清楚，下面將對本發(fā)明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述。實施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規(guī)產品。以下結合實施例對本發(fā)明的特征和性能作進一步的詳細描述。實施例11采用rt-pcr方法檢測gm20541基因在不同組織的表達情況。方法：分別提取小鼠腦、肝臟、視網膜、腸、肌肉、心臟、腎臟以及脾的總rna，然后用cdna合成試劑盒(invitrogen,waltham,ma,usa)合成cdna。根據gm20541的cdna序列設計引物：gm20541-cdna-f：5’-tcggtctcatcttcattccc-3；gm20541-cdna-r：5’-ggaaggctctgttccggtat-3。以提取的cdna為模板，進行rt-pcr。擴增后進行電泳，結果見圖1。結果見圖1中a和b，可以看出，通過rt-pcr方法檢測gm20541基因在小鼠腦、肝臟、視網膜、腸、肌肉、心臟、腎臟以及脾中的表達。西藏基因敲除動物模型造模